Ｍｅｄｉａｔｏｒ　ｐｒｏｂｅ　ＰＣＲ　ＨＲＭＡ法を用いた新規食中毒菌検査法の開発

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食品会社では食中毒事故の発生を未然に防ぐためにも原料や製造ライン、仕掛品、最終製品について食中毒菌の検査を行っている。これらの検査頻度を増やし、綿密な検査を行うほど食品の安全性を高めることが可能であるが、それには検査にかかる労力や時間、コストが問題となっている。そこで本研究では、Mediator probe PCR　HRMA法による食中毒菌検出手法の構築を目的に研究を実施した。本年度は、Listeria monocytogenesを対象にMediator probe PCR HRMA法を開発した。まず、Mediator probe PCR法の反応機構が構想通りに進んでいることを、Mediatorの解離およびby-productの生成の二段階に分けて確認した。また、本PCR法とHRMA法を組み合わせた手法の検出限界は4logCFU/mlであり、昨年度開発した増菌培地と本PCR-HRMA法を併用することで食品中の食中毒菌を十分に検出できると考えられた。本研究で開発したPCR法は、通常のPCRのように増幅産物の有無を電気泳動により確認する必要がなく、さらにはTaqMan probe PCR法のように蛍光標識を使用しないため、より簡易で迅速、低コストなPCR検査が可能であると考えられた。一方、使用するMediator probeやReporterはin silicoで特異性を考慮しながら設計したが、PCR反応液への添加濃度によっては非特異産物生成の原因になることも明らかとなり、開発したMediator probe PCR HRMA法を、複数の食中毒菌を同時に検出できる多重検出系にするには、さらなる検討が必要であった。本研究の成果は、食品科学に関する国際学会である31st EFFoST international conferenceにて発表した。