Ｍｅｄｉａｔｏｒ　ｐｒｏｂｅ　ＰＣＲ　ＨＲＭＡ法を用いた新規食中毒菌検査法の開発

利用介体探针PCR HRMA法开发新的食物中毒细菌检测方法

• 批准号: 16J09371
• 负责人: 大島 千尋
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tokyo University of Marine Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J09371/
• 关键词: 食中毒菌; PCR検出; 高度融解曲線解析(HRMA); Listeria monocytogenes; 一斉増菌培地; 一斉検出; HRMA(高度融解曲線解析）

食品会社では食中毒事故の発生を未然に防ぐためにも原料や製造ライン、仕掛品、最終製品について食中毒菌の検査を行っている。これらの検査頻度を増やし、綿密な検査を行うほど食品の安全性を高めることが可能であるが、それには検査にかかる労力や時間、コストが問題となっている。そこで本研究では、Mediator probe PCR　HRMA法による食中毒菌検出手法の構築を目的に研究を実施した。本年度は、Listeria monocytogenesを対象にMediator probe PCR HRMA法を開発した。まず、Mediator probe PCR法の反応機構が構想通りに進んでいることを、Mediatorの解離およびby-productの生成の二段階に分けて確認した。また、本PCR法とHRMA法を組み合わせた手法の検出限界は4logCFU/mlであり、昨年度開発した増菌培地と本PCR-HRMA法を併用することで食品中の食中毒菌を十分に検出できると考えられた。本研究で開発したPCR法は、通常のPCRのように増幅産物の有無を電気泳動により確認する必要がなく、さらにはTaqMan probe PCR法のように蛍光標識を使用しないため、より簡易で迅速、低コストなPCR検査が可能であると考えられた。一方、使用するMediator probeやReporterはin silicoで特異性を考慮しながら設計したが、PCR反応液への添加濃度によっては非特異産物生成の原因になることも明らかとなり、開発したMediator probe PCR HRMA法を、複数の食中毒菌を同時に検出できる多重検出系にするには、さらなる検討が必要であった。本研究の成果は、食品科学に関する国際学会である31st EFFoST international conferenceにて発表した。

Food で society は food poisoning accident の 発 raw に を what shall prevent ぐ た め に も raw material や ラ イ ン, shi hang products, final products に つ い て food pathogens の 検 check line を っ て い る. こ れ ら の 検 check frequency を raised や し, smooth な 検 check line を う ほ ど high food safety の を め る こ と が may で あ る が, そ れ に は 検 check に か か る 労 や time, コ ス ト が problem と な っ て い る. そ こ で this study で は, Mediator probe PCRHRMA method に よ る food pathogens 検 piece の build を purpose に を of study be applied し た. In the current year, に, Listeria monocytogenesを vs. にMediator probe PCR HRMA を developed た. ま ず, Mediator の probe PCR method against 応 institutions が idea sense り に into ん で い る こ と を, Mediator の dissociation お よ び by - product の generated の two Duan Jie に points け て confirm し た. ま た, the PCR method と HRMA を group み close わ せ た gimmick の 検 gauge は 4 logcfu/ml で あ り, yesterday's annual 発 し た raised bacteria petty と this PCR を HRMA method and す る こ と で の food pathogens in food を very に 検 out で き る と exam え ら れ た. This research で open 発 し は た PCR method, usually の PCR の よ う に raised product picture の presence of bathing を electric 気 に よ り confirm す る necessary が な く, さ ら に は TaqMan probe PCR method の よ う に 蛍 light logo を use し な い た め, よ り simple で quickly, low コ ス ト な PCR 検 may check が で あ る と exam え ら れ た. Side, use す る Mediator probe や Reporter は in silico で specificity を consider し な が ら design し た が, PCR 応 liquid へ の add concentration に よ っ て は nonspecific product generated の reason に な る こ と も Ming ら か と な り, open 発 し た Mediator probe PCR HRMA を, plural の food pathogens を simultaneously に 検 out で き る multiple 検 out department に す る に は, さ ら な る beg が 検 necessary で あ っ た. The research results of this study are する and related to the に of food science する international conference である31st EFFoST international conferenceにて.

项目成果

Development of a novel multiplex detection method with High Resolution Melting Analysis for foodborne pathogens in meat

开发一种新型多重检测方法，采用高分辨率熔解分析来检测肉类中的食源性病原体

• 发表时间: 2017
• 作者: Chihiro Ohshima;Hajime Takahashi;Ayaka Nakamura;Takashi Kuda;Bon Kimura
• 通讯作者: Bon Kimura

Research and Development Center/Betagro Group(タイ)

研发中心/Betagro集团（泰国）

Program in Biotechnology/Faculty of Science/Chulalongkorn University(タイ)

生物技术项目/理学院/朱拉隆功大学（泰国）

主要食中毒菌のための一斉増菌培地の開発とその評価

主要食物中毒菌同步增菌培养基的研制与评价

• 发表时间: 2017
• 作者: 中村綾花;大島千尋;高橋肇;久田孝;木村凡
• 通讯作者: 木村凡