中枢神経前駆細胞による神経変性疾患発症抑制機構の解明

阐明中枢神经祖细胞抑制神经退行性疾病发病的机制

• 批准号: 16J09279
• 负责人: 中野 真行
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J09279/
• 关键词: 神経変性疾患; NG2グリア; 光誘導性細胞傷害技術; ファイバー型蛍光顕微鏡

本研究は、神経変性疾患における新たな病態理解を目指し、非侵襲的で細胞傷害程度と傷害領域を制御することができる「光誘導性細胞傷害制御技術」を開発する。そして、本技術と神経変性疾患モデルマウスを用いて、NG2グリアの機能を脳領域選択的に低下させることにより、NG2グリアの神経変性疾患における病態関与を明らかにすることを目的とした。平成２８年度は、光誘導性細胞傷害制御技術の確立を目指し、外部機関から分与して頂いた遺伝子改変動物を掛け合わせ、NG2グリア特異的に細胞傷害性蛍光タンパク質であるKillerRedを発現するマウスを作製した。しかしながら、遺伝子発現レベルや免疫染色法ではKillerRedの発現を確認する事ができなかった。代替案として、アデノ随伴ウイルス(AAV)を用いて、NG2グリアにおける KillerRed の発現誘導を試みた。NG2グリアに感染しやすいセロタイプであるAAV5を使用し、KillerRed遺伝子を導入した AAV5-KillerRed を作製した。精製・力価測定後の AAV5-KillerRed をマウスの海馬領域に注入し、KillerRed の発現を評価した。KillerRed の発現は確認されたが、遺伝子発現の細胞特異性がなく、神経細胞にも KillerRed の発現が確認され、実験を中断した。この問題を解決するには、NG2グリア特異的な遺伝子プロモーター(NG2やPDGFRαなど)を導入したNG2-KillerRedやPDGFRα-KillerRedレトロウイルスやレンチウイルスベクターを作製する必要がある。また光誘導性細胞傷害制御技術を確立する上で、ファイバー型蛍光顕微鏡のレーザー照射条件の設定が求められるため、蛍光タンパク質を脳内で発現するマウスを用いて、レーザー照射だけでは細胞脱落しない照射条件を検討した。

This study は, god 経 - disorder に お け る new た な pathological understanding を refers し cell damage degree, noninvasive で と を damage field suppression す る こ と が で き る "light induced cell damage suppression technology" を open 発 す る. そ し て, this technical と 経 god - disorder モ デ ル マ ウ ス を with い て, NG2 グ リ ア の function を 脳 sentaku in the field of low に さ せ る こ と に よ り, NG2 グ リ ア の 経 god - disorder に お け る pathological masato Ming ら を か に す る こ と を purpose と し た. 28 year は pp.47-53, light induced cell damage suppression technology の establish を refers し, external machine masato か ら points with し て top い た heritage 伝 child to hang - animal を け わ せ, NG2 グ リ ア specific に cell damaging 蛍 light タ ン パ ク qualitative で あ る KillerRed を 発 now す る マ ウ ス を cropping し た. し か し な が ら, but 伝 発 now レ ベ ル や immune staining で は KillerRed の 発 を now confirmed す る matter が で き な か っ た. Instead of case と し て, ア デ ノ with accompanying ウ イ ル ス (AAV) を い て, NG2 グ リ ア に お け る KillerRed の 発 induced を now try み た. NG2 グ リ ア に infection し や す い セ ロ タ イ プ で あ る AAV5 を use し, KillerRed but 伝 を import し た AAV5 - KillerRed を cropping し た. After the refinement and force 価 determination, <s:1> AAV5-KillerRed を ウス ウス <s:1> hippocampal field に injection を, KillerRed <s:1> occurrence を evaluation 価 た た. The occurrence of KillerRed is confirmed by されたが, the occurrence of 伝 offspring is confirmed by <s:1> cell-specific がなく, the occurrence of neural cells is に <s:1>, the occurrence of KillerRed is confirmed by が, and the experimental を is interrupted by た. こ の を solve す る に は, NG2 グ リ ア な of specific 伝 son プ ロ モ ー タ ー (NG2 や PDGFR alpha な ど) を import し た NG2 - KillerRed や PDGFR alpha KillerRed レ ト ロ ウ イ ル ス や レ ン チ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を cropping す る necessary が あ る. ま た light induced cell damage suppression technology を establish す る で, フ ァ イ バ ー type 蛍 light 顕 micromirror の レ ー ザ ー の irradiation conditions set が o め ら れ る た め 蛍 light タ ン パ ク qualitative を 脳 within で 発 now す る マ ウ ス を with い て, レ ー ザ ー irradiation だ け で は cell falls off し な い exposure condition を beg し 検 た.

项目成果

Development of in vitro and in vivo evaluation systems for novel non-coding RNA, SINEUP, to enhance translation level of target genes as a nucleic acid medicine.

开发新型非编码RNA的体外和体内评价系统SINEUP，以提高作为核酸药物的靶基因的翻译水平。

• 发表时间: 2016
• 作者: Nitta;K. Takahashi;H. Nakano;M. Suzuki;AM. Kozhuharova;A. Sharma;H. Kataoka;Y. Zucchelli;S. Gustincich;S. Carninci;P.
• 通讯作者: P.

NG2グリアの神経炎症抑制と神経細胞保護

NG2 胶质细胞抑制神经炎症并保护神经细胞

• 发表时间: 2016
• 作者: Kei Nishida;Atsushi Tamura;Nobuhiko Yui.;中野真行
• 通讯作者: 中野真行

エネルギー代謝の低下に着目した疲労動物モデルにおける脳内神経炎症の惹起

在疲劳动物模型中诱导脑内神经炎症，重点关注能量代谢下降

• 发表时间: 2016
• 作者: 大和正典;久米慧嗣;中野真行;江口麻美;高田孔美;田村泰久;片岡洋祐
• 通讯作者: 片岡洋祐

NG2 glial cells regulate neuroimmunological responses to maintain neuronal function and survival.

• DOI: 10.1038/srep42041
• 发表时间: 2017-02-14
• 期刊: Scientific reports
• 影响因子: 4.6
• 作者: Nakano M;Tamura Y;Yamato M;Kume S;Eguchi A;Takata K;Watanabe Y;Kataoka Y
• 通讯作者: Kataoka Y

Effect of atmospheric-pressure plasma irradiation on the central nervous system of adult rats.

常压等离子体辐照对成年大鼠中枢神经系统的影响。

• 发表时间: 2016
• 作者: Kataoka;Y. Yamato;M. Nakano;M. Kume;S. Tamura;Y.
• 通讯作者: Y.