Genetic and biochemical characterization of SRS2 and the RecQ helicases of plants

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Wir konnten bereits Homologe von RecQ DNA Helikasen in Arabidopsis thaliana identifizieren und die exonukleolytische Aktivität des RecQ-verwandten Proteins AtWRNexo biochemisch charakterisieren. Nun soll die biochemische Charakterisierung der RecQ Helikasen sowie der vermutlich antagonistischen Srs2 Helikase vorangetrieben werden. Dabei sollen die Proteine im heterologen Systemen exprimiert werden. Die Untersuchungen sollen die Substratspezifität bei der Entwindung ebenso klären, wie die Frage in welcher mono- oder oligomeren Form die Helikasen aktiv sind. Nachdem wir eine größere Anzahl von Insertionsmutanten von Arabidopsis isoliert und bereits erste Hinweise auf genomische Instabilitäten im mutanten Hintergrund erhalten haben, sollen parallel die Funktion der Helikasen in vivo geklärt werden. Dabei wird mit Hilfe von transgenen Testerlinien die Beteiligung der einzelner Helikasen an verschiedenen Rekombinationswegen (intrachromosomale, interchromosomale, homeologe sowie meiotische Rekombination) geprüft. Schließlich soll versucht werden mittels biochemischer und genetischer Ansätze Interaktionsnetzwerke zwischen den Helikasen und anderen in DNA Rekombinationsprozesse involvierten Proteinen zu definieren, um die Rolle der einzelnen Helikasen umfassend zu charakterisieren.