細胞外分泌小胞エクソソームを介した卵巣機能の新規制御メカニズムの解明

阐明细胞外分泌囊泡、外泌体介导的卵巢功能新调节机制

• 批准号: 17J00618
• 负责人: 松野 雄太
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-26 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J00618/
• 关键词: エクソソーム; 卵巣; 卵胞; 顆粒膜細胞; 分泌小胞; 妊孕性; 遺伝子改変マウス

本研究では，哺乳類の卵巣機能の制御について理解を深めるために，個体レベルで卵巣内エクソソームが卵巣機能に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした．これまでに，卵巣の卵胞内に存在するエクソソームが卵巣機能に与える影響を明らかとするために，研究材料として卵胞が大きく食肉処理場で容易に大量の卵巣が得られるブタをモデルに，卵胞内エクソソームの存在確認と，卵巣機能に重要な役割を果たす壁顆粒膜細胞と卵丘細胞に与える影響の解析を行った．その結果，ブタの卵巣の卵胞内にエクソソームが存在すること，さらに，(1) 排卵に必須の現象である卵丘膨化に促進的な影響を及ぼすこと，(2) TGF-βシグナルの関連遺伝子の発現に影響を及ぼすことを明らかとし，卵胞内のエクソソームが卵巣機能を制御する新たな因子である可能性を見出した．そこで本研究では，卵胞内エクソソームの個体レベルの生理機能を解明するため，まず，(1)卵胞でエクソソームの分泌制御に必要な遺伝子を同定すること．次に，(2)それを標的とする遺伝子改変動物を作製し，(3)その表現型を解析すること．さらに，(4)遺伝子改変動物で観察された表現型がエクソソームの欠損に起因することを解析することとした．卵胞の主たる体細胞である壁顆粒膜細胞でエクソソームの分泌に必要な遺伝子の同定を完了した．計画当初は，Cre-loxPシステムを用いた卵胞特異的に遺伝子を欠損する遺伝子改変マウスを作製する予定であったが，時間を要したため，上記システムを用いた遺伝子改変マウスの作製には取りかかれなかった．しかしながら，同定した遺伝子における全身性遺伝子改変マウスをCRISPR/Cas9システムを利用して作製し，一部の系統において，卵胞発達に異常が観察されたことから，この表現型にエクソソームが関わっている可能性を見出した．

This study で は, mammals の egg 巣 function の suppression に つ い て understand を deep め る た め に, individual レ ベ ル で egg 巣 エ ク ソ ソ ー ム 巣 function に が eggs and ぼ す influence を Ming ら か に す る こ と を purpose と し た. こ れ ま で に, egg 巣 の に exist within follicle す る エ ク ソ ソ ー ム が eggs 巣 function に with え る influence を Ming ら か と す る た め に, research materials と し て follicle が big き く carnivorous 処 Richard で easy に large の eggs 巣 が have ら れ る ブ タ を モ デ ル に, within the follicle エ ク ソ ソ ー ム の confirm と there, Egg 巣 function に important な "を cut fruit た す wall granule membrane cells と egg mound に and え る influence line analytical を の っ た. そ の results, ブ タ の eggs 巣 の within the follicle に エ ク ソ ソ ー ム が exist す る こ と, さ ら に, (1) the phenomenon of ovulation に must の で あ る eggs high puffed に promote な influence を and ぼ す こ と, (2) TGF - beta シ グ ナ ル の masato even heritage 伝 son の 発 に influence を and now ぼ す こ と を Ming ら か と し, Within the follicle の エ ク ソ ソ ー ム が eggs 巣 function を suppression す る new た な factor で あ る を likely see a し た. そ こ で this study で は, within the follicle エ ク ソ ソ ー ム の individual レ ベ ル の physiology を interpret す る た め, ま ず, (1) the follicle で エ ク ソ ソ ー ム の secretion system な royal に necessary heritage 伝 を son be す る こ と. に, (2) そ れ を mark と す る heritage change - animal を son 伝 し, (3) そ の phenotype を parsing す る こ と. さ ら に, (4) posthumous son 伝 change - animal で 観 examine さ れ た phenotype が エ ク ソ ソ ー ム の owe loss cause に す る こ と を parsing す る こ と と し た. Follicle の main た る somatic で あ る で particles membrane cell walls エ ク ソ ソ ー ム の secretion に necessary な heritage 伝 son の be finished を し た. Plan at the beginning は, Cre - loxP シ ス テ ム を with い た に of follicle specific 伝 を son owe loss す る heritage 伝 child change - マ ウ ス を cropping す る designated で あ っ た が, time を し た た め, written シ ス テ ム を with い た heritage 伝 child change - マ ウ ス の cropping に は take り か か れ な か っ た. し か し な が ら, with し た posthumous son 伝 に お け る systemic heritage 伝 child change - マ ウ ス を CRISPR/Cas9 シ ス テ ム を using し し the て cropping systems, a の system に お い て, follicle 発 に exception が 観 examine さ れ た こ と か ら, こ の phenotype に エ ク ソ ソ ー ム が masato わ っ て い る を likely see a し た.

项目成果

Mouse granulosa cells secrete exosomes independently of oocyte regulation in vitro

小鼠颗粒细胞在体外独立于卵母细胞调节分泌外泌体

• 发表时间: 2017
• 作者: 松野雄太;Dang Quoc Thuyet;藤井渉;大下誠一;内藤邦彦;杉浦幸二
• 通讯作者: 杉浦幸二

Mouse granulosa cells secrete functional extracellular vesicles in vitro.

小鼠颗粒细胞在体外分泌功能性细胞外囊泡。

• 发表时间: 2017
• 作者: Tosif Ahamed;Greg Stephens;中山 真緒;小原美紀・中山真緒;中山 真緒;中山 真緒;中山 真緒;中山 真緒;Mao Nakayama;中山 真緒;中山 真緒;松野雄太，藤井渉，内藤邦彦，杉浦幸二
• 通讯作者: 松野雄太，藤井渉，内藤邦彦，杉浦幸二