体細胞から始原生殖細胞を直接誘導する試みと個体発生全能性の解明

尝试从体细胞直接诱导原始生殖细胞并阐明个体发育全能性

• 批准号: 17J02039
• 负责人: 関中 保
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-26 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J02039/
• 关键词: ダイレクトリプログラミング; MEF; PGC; 直接誘導

マウス胎仔線維芽細胞（MEF）から始原生殖細胞（PGC）を直接誘導するために、既存のトランスクリプトームデータ再解析により、MEFに比べてPGCで発現が高い等の基準で21の転写因子を絞り込み、MEFでの過剰発現を行った。その結果、MEFと比べPGCで発現が高い遺伝子（PGCマーカー）が発現誘導される細胞集団が見られ、さらに様々な条件検討により、わずか3遺伝子まで絞り込むことに成功した。しかし、細胞集団における解析ではPGCマーカーが発現誘導されていない細胞が混在した状態であるため、正確な発現誘導の程度等を解析することが困難であった。そこで、単一細胞レベルで遺伝子発現定量が可能なシングルセルRT-qPCRの実験系を確立し、解析を行ったが、PGCマーカーの発現上昇が見える実験回と見えない実験回があったりと、安定した結果が得られなかった。そこで、シングルセル解析系の反応時間等の変更など様々なプロトコル改訂を行ったが結果は安定しなかった。一方、ES細胞を含む株化した細胞株では安定した結果が得られたことから、詳しい原因は不明だが、本実験系は、処理を行ったMEFとは相性が悪く、安定した結果が得られないと考えられた。このように、当初の研究計画とは大幅に予定が変わり、目標としていたMEFからPGCの直接誘導には至らなかったものの、本研究により示唆された、MEFではわずか3遺伝子によりPGCマーカーの遺伝子発現が制御されている可能性は、これまでに報告がなく、この3遺伝子によるPGCマーカーの発現制御機構など、解決するべき課題はまだあるが、本研究で得られた知見はMEFをはじめとする体細胞から始原生殖細胞を直接誘導する条件、また、体細胞と生殖細胞の性質の違いを分け隔てている分子機構や個体発生全能性解明の重要な基盤になると考えられる。

The basic level of fetal germ line maintenance cell (MEF) and primordial reproductive cell (PGC), such as direct induction, reanalysis, MEF analysis, PGC response, and so on, are very important. According to the results, MEF compared with PGC to show that the cell collection of PGC cells was successful, and that the condition was correct. In terms of data analysis, PGC data analysis, data analysis, and so on, we can see that the data is mixed in the status of the computer, and the correct level of guidance is correct. It is possible to determine whether the RT-qPCR is correct, parse, and PGC. You can see that the response is not correct, and the results show that the results are satisfactory. The response time is due to the change of the operating system. The results show that it is stable and stable. On the one hand, ES cell culture showed that the cell strain was stable and stable. The results showed that the cause of the disease was unknown, the cause of the disease was unknown, the cause was unknown, the cause of the disease, the cause of the disease, the cell line, the cell, the cell, In the first part of the research program, there was a large-scale prediction of the situation, and the goal was that the MEF PGC was directed directly to the target. In this study, the study indicated that it was possible to control the potential of the PGC, and that the report of the PGC was not a good idea. In this study, we learned that MEF cells were directly guided by primordial reproductive cells, and that the conditions for direct guidance of primordial reproductive cells were obtained in this study. The body, reproductive, sexual, sexual, and molecular mechanisms are separated from each other, and the biological totipotency is used to understand the importance of important genes.