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高効率的タンパク質合成法開拓によるＣＸＣＬ１４機能発現機構の解明と創薬への展開

通过开发高效蛋白质合成方法阐明CXCL14功能表达机制及其在药物发现中的应用

基本信息

批准号：
17J03475
负责人：
成瀬公人
金额：
$ 1.6万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、効率的なタンパク質化学合成法の開発を基盤としたケモカインCXCL14の機能発現機構の解明と創薬への展開を目的としている。申請者の研究グループは、CXCL14が細菌などに含まれる非メチル化CpG DNAを細胞外から細胞内エンドソーム・リソソーム中のTLR9に運搬する運び屋分子として機能し、免疫反応を増強することを明らかにしている。しかし、一連の免疫活性化におけるCXCL14の重要なドメインであるDNA結合ドメインおよび受容体認識ドメインは明らかになっていない。そこでCXCL14の活性発現に重要なドメインを同定するために、今年度は申請書で示した通り、CXCL14のN末端領域である1-50残基に各種改変を導入したCXCL14誘導体の合成を行い、in vitro実験により活性発現に重要な構造ドメインの絞り込みを行った。その結果、N端領域中の二つのループ領域が、DNA結合ドメインおよび受容体認識ドメインであることを見出した。また、各種合成したCXCL14誘導体の活性評価の結果より、CXCL14による免疫活性化がCXCL14構造中の47残基だけでも再現可能であることを見出し、CXCL14の小分子化を行った。さらに、CXCL14-CpG DNA複合体のX線結晶構造解析実験および、in vivo実験のために、前年度までに確立したCXCL14の合成法を基盤とし、CXCL14誘導体の大量合成を達成した。

This study is based on a highly efficient chemical synthesis method of naphtha. The functional development mechanism of ンCXCL14 has the purpose of explaining and developing the mechanism. The applicant's research on CXCL14 bacteria and CXCL14 contains non-containing CpG DNA extracellular and intracellular transport of TLR9 The molecular structure of the house is functional, and the immune response is enhanced and strengthened.しかし、一连のimmune activation におけるCXCL14のimportant なドメインであるThe DNA-binding receptor recognizes the DNA-binding receptor.そこでCXCL14's active expression is now important and the same is the same as the determination, this year's application form is not shown and CX Various modifications and introduction of residues 1-50 in the N-terminal domain of CL14 and the synthesis of CXCL14 inducers are carried out. Vitro 実験によりactive発appearにimportantなstructuralドメインの炊込みを行った.その results, N-terminal domain in the の二つのループ domain が, DNA binding ドメインおよび receptor recognition ドメインであることを见出した.また, Activity evaluation results of various synthetic CXCL14 inducers, CXCL14 immune activation がCX The 47th residue in the CL14 structure can be reproduced in a way that is possible, and CXCL14 can be made into a small molecule.さらに、X-ray crystallographic structure analysis of CXCL14-CpG DNA complex 実験および、in Vivo has established a comprehensive method for synthesizing CXCL14 in the previous year, and established a comprehensive synthesis method for CXCL14 in the previous year.