転写因子Tcf21の機能解析を通じた腎線維化の機序解明

通过转录因子Tcf21的功能分析阐明肾纤维化的机制

基本信息

批准号：
17J03714
负责人：
井出真太郎
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2017
资助国家：
日本
起止时间：
2017-04-26 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J03714/
关键词：
腎線維化転写因子慢性腎臓病

项目摘要

慢性腎臓病は、腎間質の線維化により末期腎不全及び腎性貧血に至る。線維化の詳細は未だ不明であり機序解明のため間質の詳細な機能解析が重要である。我々は転写因子Tcf21が間質細胞において発現し、発生及び間質細胞の線維化において重要な役割を果たしていることを示した。当該年度では、Tcf21が腎臓線維化においてどのように働いているかについて検討を行なった。まず、Doxycycline(2mg/ml)を3週間投与することでTcf21欠損を誘導することができるマウス(Rosa-rtTA/tetOCre/Tcf21lox/lox：iTcf21マウス)を作成した。このiTcf21KOマウスに対して　出生後1週目にDoxycycline(2mg/ml)を3週間投与し、腎臓におけるTcf21発現及び表現形について検討した。iTcf21マウス腎臓では、Tcf21発現量はコントロール群の10％以下になっておりTcf21欠損が機能していることを確認した。次に、このマウスに対して、片側尿管結紮術を行うことで腎線維化を誘導した。腎臓を摘出し線維化マーカーであるI型コラーゲン及びフィブロネクチンの発現検討を行った。コントロールでは結紮側でのI型コラーゲンの発現が、健側と比較して6.4倍と上昇していたのに対し、iTcf21では、3.1倍の上昇であった。また、フィブロネクチンもコントロールで6.3倍に対し、iTcf21　マウスで2倍の上昇であった。以上の結果からTcf21欠損により線維化マーカーが抑制されることからTcf21は線維化促進的に働いていると考えられた。最後に腎臓間質特異的にGFPを発現するマウスを作成し、腎臓間質細胞をGFPでタグ付けを行なった。このマウス腎臓に対して、FACSを用いたCell sortingを行うことでコントロール及びTcf21欠損した腎臓間質細胞の単離を行なった。

慢性肾脏疾病导致肾脏纤维化导致末期肾衰竭和肾脏贫血。纤维化的细节仍然未知，基质的详细功能分析对于阐明机制很重要。我们已经表明，转录因子TCF21在基质细胞中表达，并且在基质细胞的发育和纤维化中起重要作用。在今年，我们研究了TCF21在肾纤维化中的工作方式。首先，准备了3周的小鼠（Rosa-rtta/Tetocre/TCF21Lox/lox：ITCF21小鼠），可以通过施用多西环素（2mg/ml）诱导TCF21缺乏症。这款ITCF21KO小鼠在出生的第一周将强力霉素（2 mg/mL）施用3周，并检查了肾脏中TCF21的表达和表型。在ITCF21小鼠肾脏中，TCF21表达水平低于对照组的10％，并且证实TCF21缺乏症是功能性的。接下来，肾纤维化是通过小鼠的单侧输尿管连接引起的。除去肾脏，并检查了I型胶原蛋白和纤连蛋白的表达（纤维化标记）。在对照组中，结扎侧I型胶原蛋白的表达比健康方面高出6.4倍，而在ITCF21中，它增加了3.1倍。此外，对照组中的纤连蛋白增加了6.3倍，在ITCF21小鼠中增加了2倍。基于上述结果，人们认为TCF21是彩纤维化，因为TCF21缺乏抑制了纤维化标记。最后，创建了专门表达GFP的小鼠，并用GFP标记肾脏基质细胞。使用FACS进行细胞分选，以隔离TCF21缺乏的对照和肾基质细胞。