チクングニアウイルスのゲノム複製を調節する新規メカニズムの解析

调节基孔肯雅病毒基因组复制的新机制分析

• 批准号: 17J04417
• 负责人: 和田 雄治
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-26 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J04417/
• 关键词: チクングニアウイルス; siRNAスクリーニング

本研究はチクングニアウイルス（CHIKV）のゲノム複製を調節する新たな宿主因子を同定する事を目的としている。報告者のこれまでの研究活動により得た知見をもとに、RCが局在する細胞膜の機能に関与する宿主因子に焦点を絞り、本研究を遂行した。初めに、CHIKVのゲノム複製効率と宿主因子の関連を解析する事を目的に、siRNAスクリーニング試験系の構築を試みた。複数のヒト由来細胞株を対象にCHIKVの感染性を免疫蛍光抗体法により評価した結果、A549細胞で明瞭なfocusを形成することが明らかとなった。CHIKV感染により形成されるfocusを指標として、siRNAによる宿主因子のノックダウン効率を検討した。Furin はプロテアーゼ機能を有する宿主タンパク質であり、CHIKV及びA549細胞を用いたsiRNAスクリーニング試験を試みた。試験対照として、CHIKVの複製に必須である事が知られているFurinを標的とするsiRNAを用いた。試験対象として、細胞膜に位置してアクチンによる細胞内輸送等に関与する事が知られているNectinファミリーを選択した。CHIKVのRCは細胞質で転写された後に細胞膜に移動する事から、細胞膜へのタンパク質輸送に関与するNectinファミリーはCHIKVのゲノム複製に寄与する可能性が推察される。Nectinタンパク質ファミリーを標的とするsiRNAライブラリーを構築し、スクリーニングを実施した結果、Nectinタンパク質ファミリーをノックダウンした細胞ではfocusの数及び大きさのばらつきが大きく、遺伝子ノックダウンとウイルス複製効率の関連性を評価する事が困難であった。このような結果が得られた要因として、本試験でCHIKV感染の指標として採用したfocusの形成機序に原因があった事が考察される。

This study aims to regulate the replication of CHIKV and identify new host factors. The reporter's research activities were carried out with the focus on cell membrane function and host factors. To analyze the relationship between the replication efficiency and host factors of CHIKV, we try to construct the siRNA system. A number of cell lines have been identified for CHIKV infectivity. CHIKV infection is a focus indicator, siRNA is a host factor, and its effectiveness is discussed. Furin has the function of host cell, CHIKV and A549 cells. To test the efficacy of the target, CHIKV must be replicated. The cell membrane is located in the middle of the cell wall. The possibility of Nectin production and replication of CHIKV in the cytoplasm of RC cells was investigated. Nectin can be used to construct and evaluate the relationship between the number of focus cells and their replication rates. The results of this study were mainly due to the factors that led to the development of CHIKV infection.

项目成果

Discovery of a novel antiviral agent targeting the nonstructural protein 4 (nsP4) of chikungunya virus.

发现一种针对基孔肯雅病毒非结构蛋白 4 (nsP4) 的新型抗病毒药物。

• DOI: 10.1016/j.virol.2017.02.014
• 发表时间: 2017
• 期刊: Virology
• 影响因子: 3.7
• 作者: Wada Y;Orba Y;Sasaki M;Kobayashi S;Carr MJ;Nobori H;Sato A;Hall WW;Sawa H
• 通讯作者: Sawa H

チクングニアウイルスのRNA依存性RNAポリメラーゼを阻害する新規抗ウイルス化合物の探索と解析

抑制基孔肯雅病毒RNA依赖性RNA聚合酶的新型抗病毒化合物的搜索和分析

• 发表时间: 2017
• 作者: Wada Y;Sasaki M;Setiyono A;Handharyani E;Rahmadani I;Taha S;Adiani S;Latief M;Kholilullah ZA;Subangkit M;Kobayashi S;Nakamura I;Kimura T;Orba Y;Sawa H;和田雄治
• 通讯作者: 和田雄治

Detection of novel gammaherpesviruses from fruit bats in Indonesia.

从印度尼西亚果蝠中检测到新型伽马疱疹病毒。

• DOI: 10.1099/jmm.0.000689
• 发表时间: 2018
• 期刊: Journal of Medical Microbiology
• 影响因子: 3
• 作者: Wada Y;Sasaki M;Setiyono A;Handharyani E;Rahmadani I;Taha S;Adiani S;Latief M;Kholilullah ZA;Subangkit M;Kobayashi S;Nakamura I;Kimura T;Orba Y;Sawa H
• 通讯作者: Sawa H