目的臓器作出に向けた一胚葉特異的なキメラ作製法の開発

开发用于靶器官生产的单胚层特异性嵌合体生产方法

• 批准号: 18H02358
• 负责人: 小林 俊寛
• 金额: $ 10.98万
• 依托单位: National Institute for Physiological Sciences
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18H02358/
• 关键词: 臓器再生; 多能性幹細胞; 三胚葉; 原腸陥入

本研究計画では、胚発生が進んだ哺乳類の初期胚に、分化細胞を導入し、狙った一胚葉の細胞系譜のみに外来の細胞を寄与させる胚葉特異的なキメラ作製技術を開発することを目的とした。この技術が確立できれば、目的臓器以外の細胞の寄与を最小限にとどめた次世代の臓器作製法の基盤技術となるだけでなく、分化細胞の機能を発生過程で厳密に評価し、細胞の可塑性や起源を知ることが可能な、新たな発生学的なツールとなることが期待される。まずドナー細胞として用いるための各胚葉細胞への分化誘導条件を決定した。これには申請者がすでに確立した、ヒトおよびサル ES 細胞の内胚葉・中胚葉の細胞への分化誘導法を、他の動物種の多能性幹細胞に適応した。サイトカインやシグナル阻害剤の添加など、様々な条件検討の結果、効率的な分化誘導法が確立されつつある。また in vitro で分化誘導された細胞と生体内の細胞の類似性を明らかにするため、胚の組織学的解析および遺伝子発現解析を行っている。特に遺伝子発現解析では、単一細胞レベルでの解析を行うため、研究室にあるセルソーターに 384 プレートへのソーティング機能を追加し、効率的な細胞の分取が可能になった。また発生が進んだ初期胚への細胞移植技術の開発として、移植における技術的な条件、特に具体的に、どの程度の細胞数を、どの位置に、どれくらい正確に移植できるかを検討し、実際に移植後の胚を仮親子宮へ胚移植し、発生させる予備実験も開始した。本研究は平成 30 年 5 月 24 日に開始する日本医療研究開発機構の委託研究を開始するにあたり、研究内容の重複により廃止することとした。

This project aims to develop embryonic-specific production techniques for the introduction of embryonic and differentiated cells into mammalian embryos, and for the transfer of foreign cells from embryonic cell lineages. This technology is established, the minimum limit of cell transfer outside the target organ is established, the substrate technology of the next generation is established, the function of differentiated cells is closely evaluated, the plasticity and origin of cells are known, the possibility and expectation of new development biology are expected. The differentiation conditions of each embryo cell were determined. This application is based on the establishment of differentiation induction methods for endoblast and mesoblast cells of ES cells and pluripotent stem cells of other animal species. The results of the investigation of the conditions and the differentiation and induction method of the efficiency are established. In vitro differentiation induction of cells, identification of cell similarities in vivo, histological analysis of embryos, and analysis of embryo development Special cell discovery analysis, single cell analysis, research room, 384-bit software, additional functions, efficient cell sorting possible The development of cell transplantation technology for early embryo transfer, the technical conditions for transplantation, the specific conditions, the degree of cell number, the location, the correct transplantation, the investigation, the preparation of embryo transfer after transplantation, and the initiation of embryo transfer. This study started on May 24, 2013, and was commissioned by the Japan Medical Research Institute.