ブタエピブラスト幹細胞とそのクローン胚による始原生殖細胞の遺伝子機能解析

利用猪外胚层干细胞及其克隆胚胎对原始生殖细胞进行基因功能分析

• 批准号: 20H03167
• 负责人: 小林 俊寛
• 金额: $ 11.15万
• 依托单位: The University of Tokyo (2021-2023)National Institute for Physiological Sciences (2020)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20H03167/
• 关键词: 始原生殖細胞; エピブラスト幹細胞; ブタ; 多能性幹細胞

NANOS3-tdTomato クローン胚の作製NANOS3-tdTomato ブタエピブラスト幹細胞の核をドナーとし、ブタ未受精卵へ体細胞核移植を行い、エピブラスト幹細胞の遺伝子型を持ったクローン胚作製を行った。ドナー細胞核として、細胞周期などの最適な条件を予備実験により検討した後、in vitro で胚盤胞形成率の評価、さらには子宮移植後の胚発生能評価を行った。クローン胚の解析は、顕著な数のPGC が生殖巣で見られる胎生26-30 日目に行い、生殖巣におけるNANOS3-tdTomato の発現を蛍光観察した。その結果、期待していた通り NANOS3-tTomato の発現は生殖巣のみで認められ、免疫染色による始原生殖細胞マーカー発現の確認により、それらレポーターが始原生殖細胞特異的に発現していることを明らかにした。以上、エピブラスト幹細胞の樹立およびそれらの遺伝子改変およびそれを元にしたクローン胎児の作製までを論文として報告した (Kinoshita, Kobayashi et al., Development (2021))。

NANOS3-tdTomato Embryo Production NANOS3-tdTomato Embryo Production Stem Cell Nuclear Transfer from Unfertilized Eggs to Somatic Cells Nuclear Transfer from Unfertilized Eggs to Stem Cell Embryo Production. To prepare optimal conditions for cell nuclear and cell cycle development, to evaluate blastoderm cell formation rate in vitro, and to evaluate embryo development after uterine transplantation. PGC analysis and reproduction of embryos were observed at 26-30 days of gestation and reproduction of NANOS3-tdTomato. The results, expectations, and development of NANOS3-tTomato are confirmed by immunostaining. The above paper reports on the establishment of stem cells and their genetic modification (Kinoshita, Kobayashi et al., Development (2021))。

项目成果

円盤状胚盤を形成する哺乳類から樹立した多能性幹細胞とその利用

从哺乳动物中建立的形成盘状盾片的多能干细胞及其用途

• 发表时间: 2020
• 作者: Toshihiro Kobayashi;Teppei Goto;Mami Oikawa;Makoto Sanbo;Yasuhiro Kazuki;Hiromitsu Nakauchi;Azim M Surani;Masumi Hirabayashi;小林 俊寛
• 通讯作者: 小林 俊寛

Blastocyst complementation using Prdm14-deficient rats for robust germline transmission

使用 Prdm14 缺陷大鼠进行囊胚互补以实现稳健的种系传播

• 发表时间: 2021
• 作者: Toshihiro Kobayashi;Teppei Goto;Mami Oikawa;Makoto Sanbo;Yasuhiro Kazuki;Hiromitsu Nakauchi;Azim M Surani;Masumi Hirabayashi
• 通讯作者: Masumi Hirabayashi

Tracing the emergence of primordial germ cells from bilaminar disc rabbit embryos and pluripotent stem cells

• DOI: 10.1016/j.celrep.2021.109812
• 发表时间: 2021-10-12
• 期刊: CELL REPORTS
• 影响因子: 8.8
• 作者: Kobayashi, Toshihiro;Castillo-Venzor, Aracely;Surani, M. Azim
• 通讯作者: Surani, M. Azim

University of Exeter/The University of Nottingham(英国)

埃克塞特大学/诺丁汉大学（英国）

生理学研究所 遺伝子改変動物作製室 HP

国立生理科学研究所转基因动物生产实验室HP