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細胞質特異的な長鎖非コードＲＮＡがＳＴＡＴシグナルに及ぼす機能の理解

了解细胞质特异性长非编码 RNA 对 STAT 信号的功能

基本信息

批准号：
18J10428
负责人：
嵯峨幸夏
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J10428/
关键词：
細胞性粘菌 lncRNA STAT RNA結合タンパク質

项目摘要

本研究は、細胞性粘菌の細胞質長鎖非コードRNA (lncRNA)であるdutA RNAについて、結合タンパク質の同定とそれらの機能解析、及びdutA RNAの局在解析を通し、細胞性粘菌の最終分化に重要なSTATaシグナルにおける細胞質lncRNAの作用機序の解明を目的とした。dutA RNAの発生時期依存的な局在変化の原因を探るため、lacZ遺伝子を利用したdutAのプロモーター解析を行い、dutA RNAの局在変化は転写段階である程度制御されることを示した。また、FLAGタグ発現株を作製してdutA RNAがsmall peptideに翻訳されないことも示した。非リン酸化STATaとdutA RNAとの関係を調べるため、panSTATa抗体の作製とYFP-STATa発現株の作製を行った。今後これらを用いて実験を行う。dutA RNA結合タンパク質の精製は、マルトース結合タンパク質 (MBP)をタグとしたMBP-Trap法を立ち上げ、細胞性粘菌レクチンのDscEなど複数の候補タンパク質を同定した。それらについてRNA免疫沈降も行いdutA RNAとの特異的結合を検証し、結合タンパク質精製の収量を上げる改良も行った。今後この方法で更なる新規タンパク質の同定を進める。RNA-seq解析のデータから、野生株とdutA RNA変異株3種を比較して発現変動遺伝子を選別した。さらに、データベースから発現時期特異性や組織特異性の特徴を抽出して照合し、RT-qPCRを行ってdutA RNAの変動によりmRNA量が変動する遺伝子を幾つか同定した。2年間の研究を通し、得られた研究成果は未知の部分が多い細胞質lncRNAの機能を理解する上で重要と言える。以上の成果について投稿論文を執筆中である。

In this study, non-cellular myxomycete cell growth RNA (lncRNA) cell culture dutA RNA assay, combined with cell culture analysis, and dutA RNA analysis were used to analyze the most important differentiation of cellular myxomycetes, which is the most important part of STATa differentiation. The sequence of cell lncRNA was used to explain the purpose of this study. The dutA RNA health-dependent office is exploring the cause, the lacZ server is using the dutA server to analyze the data, and the dutA RNA office is controlling the performance of the system at the appropriate level. The current plant will be displayed in the form of dutA RNA, FLAG, small peptide, and display. Non-acidified STATa, dutA RNA, anti-panSTATa, anti-panSTATa, anti-DNA, anti-DNA and anti-DNA. In the future, we will use the following words to make sure that we have a lot of money. DutA RNA was used to determine the number of myxomycetes (DscE). The results showed that there was no significant difference between the two methods (MBP). The MBP-Trap method was used in the diagnosis of myxomycetes and myxomycetes. In this study, the combination of RNA immunoprecipitation and dutA RNA immunoprecipitation was used to improve the quality of dutA RNA immunology. In the future, the new rules and regulations will be updated. RNA-seq analysis showed that both the wild strain and the wild strain of dutA RNA were more sensitive than the wild strain. In the current period, the special organization, special After two years of research, the results of the research are unknown. Some of the multi-cell lncRNA are able to understand the important words on the table. The above results will be submitted in the middle of the implementation.