ＴＲＦ２を介したＯＲＣリクルートによるテロメア維持機構の特異的変異体を用いた解析

使用特定突变体分析 TRF2 介导的 ORC 招募的端粒维持机制

• 批准号: 18J11443
• 负责人: 比嘉 允宣
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J11443/
• 关键词: DNA複製; DNA複製開始点; 染色体安定性; ゲノム安定性; テロメア; 複製困難な領域; TRF2; ORC; ORC1

H30年度までにORCとの結合のみを欠損したTRF2 (E111A/E112A)変異体（以下、TRF2 (EE)変異体）を同定し、HeLa細胞の遺伝子編集により内在性TRF2とTRF2 (EE)変異体を置換したTRF2 (EE)株および比較対象のTRF2 (WT)株を樹立した。さらに、TRF2 (EE)株ではTRF2 (WT)株と比べ、テロメア結合ORC量が少ないことや複製ストレス存在下におけるテロメア含有微小核の数が多いことを明らかにし、TRF2-ORC結合がテロメアへのORC結合や複製ストレス存在下でのテロメア恒常性維持に重要であることを示した。R1年度の実績を以下に述べる。テロメアORC結合阻害がテロメアの複製ストレス感受性に影響するかどうかを更に明らかにするため、複製ストレス下における樹立株でのテロメア損傷度（DNA損傷応答因子53BP1と共局在するテロメアfociを10個以上含む細胞の割合として定義）を評価した。その結果、TRF2 (EE)株では0.1 mMヒドロキシウレア処理による弱い複製ストレスの誘導によりテロメア損傷度が増加した一方、TRF2 (WT)株では変化しなかった。前述の結果と同様この結果も、テロメアORC結合が複製ストレス下におけるテロメアの維持に重要であることを示唆している。ORCの代表的な機能は、MCM複合体を染色体に装着し、DNA複製開始点を形成することである。そこで、TRF2-ORC結合を介したテロメア維持機構を調べるため、テロメア結合MCM量の解析をChIP-qPCR法などにより進めた。その結果、TRF2 (EE)株ではテロメアへのMCM装着量が低下傾向にあることが示された。これまでの結果を総合し、TRF2-ORC結合を介して複製ストレス存在下で利用される予備のDNA複製開始点が形成されることがテロメア恒常性維持に重要であると考えている。

The results of the H30 annual ORC test combined with the TRF2 (E111A/E112A) body (below, TRF2 (EE) body) were the same, and the HeLa cell subset was similar to that of the internal TRF2 TRF2 (EE) strain. The TRF2 (EE) strain was similar to the TRF2 (WT) strain. In the presence of TRF2-ORC, TRF2 (EE) strain TRF2 (WT) and ORC, the presence of micronuclei in the presence of micronuclei, the presence of TRF2-ORC, the presence of ORC, the presence of DNA, the presence of DNA, DNA. The following is the description of the R1 annual budget. Use the combination of ORC and 53BP1 to detect the sensitivity of the foci to detect the sensitivity of the virus. To make a copy of the cloud, to make a copy of the virus, the response factor 53BP1 can be used to verify the sensitivity of the plant. The results showed that TRF2 (EE) strain 0.1 mM (WT) strain was sensitive and sensitive, while that of TRF2 (WT) strain was significantly higher. The aforementioned results are consistent with the results, ORC and copy data to improve the maintenance of important information. The computer function represented by ORC, the chromosome assembly of MCM complex, and the starting point of DNA replication form a genetic mutation. The combination of TRF2-ORC and MCM, the combination of MCM and MCM, the analysis of ChIP-qPCR, and the improvement of MCM method. The results showed that the TRF2 (EE) strain showed a low dose of MCM in the first place. The result of this experiment is that the combination of TRF2-ORC and the combination of replication and replication can be used to form the starting point of DNA replication to form the stability and maintenance of critical data.

项目成果

TRF2-ORC結合およびテロメア内複製開始点の重要性の解析.

TRF2-ORC 结合分析和端粒内复制起点的重要性。

• 发表时间: 2018
• 作者: Nozomi Sugimoto;Nari Fujita;Saki Tsujita;Takuto Iwamura;Kazumitsu Maehara;Kazumasa Yoshida;Yasuyuki Ohkawa;Masatoshi Fujita;岩渕有希子;藤山拓巳;比嘉允宜
• 通讯作者: 比嘉允宜

ORC recruitment by TRF2 contributes to telomere stability upon DNA replication stress

TRF2 招募 ORC 有助于 DNA 复制应激时端粒的稳定性

• 发表时间: 2019
• 作者: Chao Tang;Yohei Sato;Tadao Tanabe;Yutaka Oyama;佐藤陽平;佐藤陽平;佐藤陽平;Yohei Sato;Yohei Sato;佐藤陽平;佐藤陽平;Yohei Sato;佐藤陽平;佐藤陽平;Yohei Sato;佐藤陽平;Yohei Sato;Yohei Sato;大野恵理;Ono Eri;Ono Eri;大野恵理;大野恵理;Mitsunori Higa
• 通讯作者: Mitsunori Higa

リピート配列におけるDNA-タンパク質複合体がヒト染色体上で誘導する複製ストレス応答の解析.

分析人类染色体重复序列中 DNA-蛋白质复合物诱导的复制应激反应。

• 发表时间: 2018
• 作者: Nozomi Sugimoto;Nari Fujita;Saki Tsujita;Takuto Iwamura;Kazumitsu Maehara;Kazumasa Yoshida;Yasuyuki Ohkawa;Masatoshi Fujita;岩渕有希子;藤山拓巳;比嘉允宜;高藤拓哉;吉田和真
• 通讯作者: 吉田和真

ORC1フラグメントによる競合阻害を用いたテロメア複製におけるTRF2-ORC1結合の生物学的意義の解明

利用 ORC1 片段的竞争性抑制阐明 TRF2-ORC1 结合在端粒复制中的生物学意义

• 发表时间: 2019
• 作者: Chao Tang;Yohei Sato;Tadao Tanabe;Yutaka Oyama;佐藤陽平;佐藤陽平;佐藤陽平;Yohei Sato;Yohei Sato;佐藤陽平;佐藤陽平;Yohei Sato;佐藤陽平;佐藤陽平;Yohei Sato;佐藤陽平;Yohei Sato;Yohei Sato;大野恵理;Ono Eri;Ono Eri;大野恵理;大野恵理;Mitsunori Higa;比嘉允宣;松田侑大
• 通讯作者: 松田侑大

TRF2にリクルートされたORC複合体は複製ストレス下でのテロメア安定性に寄与している.

TRF2 招募的 ORC 复合物有助于复制应激下端粒的稳定性。

• 发表时间: 2019
• 作者: 比嘉允宣;松田侑大;杉本のぞみ;吉田和真;藤田雅俊
• 通讯作者: 藤田雅俊