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Ａ型インフルエンザウイルスの亜型間交差感染防御免疫に携わるＩｇＡ抗体の機能解析

甲型流感病毒亚型间交叉感染保护性免疫中IgA抗体的功能分析

基本信息

批准号：
18J20917
负责人：
奥谷公亮
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

A型インフルエンザウイルス (IAV) のマトリックス2タンパク質 (M2) は、ウイルス株間でアミノ酸配列が高く保存されている。M2はウイルスの細胞内侵入および出芽に重要な役割を担っているため、様々な亜型のIAVに対して抗ウイルス活性を有する抗M2抗体も報告されている。これまでの研究から、ウイルス特異的IgA抗体が、従来の中和活性とは異なるメカニズム (ウイルス出芽阻害) によって、IAVの亜型間交差感染防御免疫に寄与することが示唆された。そこで、M2に結合するIgA抗体に着目し、同様の抗ウイルス活性が認められるか否かを検証した。異なる亜型のM2に結合能を有する非中和抗体の可変領域の遺伝子配列を元に構築した抗体発現プラスミドを用いて、同じ可変領域をもつIgGおよびIgA抗体を作出した。IgA抗体はさらに単量体 (m-IgA)、二量体 (d-IgA)、三・四量体 (t/q-IgA) に分画した。2株の異なる亜型 (H2N2およびH3N2) のIAVに対するプラーク形成能に及ぼす影響をこれらの抗体間で比較したところ、t/q-IgA抗体存在下では、両IAV株のプラークサイズがIgG抗体存在下と比較して有意に縮小した。また、感染細胞の上清中に含まれるウイルスタンパク質量およびウイルス遺伝子量は、t/q-IgA抗体存在下でIgGおよびm-IgA抗体存在下と比較して有意に減少した。しかしながら、各抗体存在下におけるIAV感染細胞を電子顕微鏡で観察したところ、ウイルス粒子が集積している像は見られなかった。一方、IAVの出芽に重要であるとされているHAとM2の共局在はt/q-IgA抗体存在下で減少する傾向がみられた。以上から、M2に結合能を有するt/q-IgA抗体は、HAとM2の共局在を阻害することでウイルス出芽を抑制することが示唆された。

Type A virus (IAV) has been identified as the most common type of virus in the world. Anti-M2 antibodies are reported to be responsible for the intracellular invasion and germination of M2 and the presence of anti-M2 activity in IAV. This study was conducted to investigate the neutralizing activity of IgA antibodies specific for IAV and the immune response to cross-infection. The IgA antibody that binds to M2 is present, and the same anti-IgA activity is recognized. Different types of M2 binding energy, non-neutralizing antibody, variable domain, subsequence, construction of antibody development, application, and variable domain, IgG and IgA antibody development IgA antibodies are divided into three levels: m-IgA, d-IgA, and t/q-IgA. Comparison of the ability to form and influence of IAV in the presence of T/q-IgA antibody between two different genotypes (H2N2 and H3N2) and in the presence of IgG antibody between IAV strains was intentional. The amount of IgG and m-IgA in the supernatant of infected cells was intentionally reduced in the presence of t/q-IgA antibodies. In the presence of various antibodies, IAV infected cells were detected by electron microscopy, and their particles were accumulated. In the presence of T/q-IgA antibody, HA and M2 have a tendency to decrease. The binding energy of HA and M2 is t/q-IgA antibody.