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Visualization and regulation of totipotent fraction in ES cell culture

ES 细胞培养中全能部分的可视化和调控

基本信息

批准号：
18J23399
负责人：
古田明日香
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagahama Institute of Bio-Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J23399/
关键词：
2細胞期様細胞 MuERV-L ES細胞全能性全能性細胞着床前胚幹細胞可視化

项目摘要

ES細胞は、胚盤胞期の将来胚体を形成する内部細胞塊から樹立された細胞であり、胎盤などの胚体外組織への分化能を失った多能性細胞であると信じられてきた。しかし、最近の研究からES細胞には非常に低い割合で内在性のレトロウイルスであるMuERV-Lを発現する細胞集団が存在することが報告された。また、これらの細胞集団は、初期の着床前胚に移植した場合に、内部細胞塊だけではなく、栄養外胚葉にも寄与することから、全能性を有すると結論されている。本研究では、MuERV-L陽性細胞を可視化し、MuERV-L陽性細胞を効率よく誘導する方法を開発すること、またMuRV-L陽性細胞に含まれる真の全能性細胞を同定することを目的として研究を行った。今年度は、脂質成分を染色する試薬BODIPYを用いてMuERV-L陽性細胞に有する卵細胞に特異的な構造をもつLD (Lipid droplet)を可視化することに成功した。また、可視化されたLDは2細胞期胚においてもMuERV-L陽性細胞と同様に可視化することを明らかにした。次に、新たな脂質合成を阻害するTriacsin Cを用いてMuERV-L陽性細胞に出現するLDがES細胞からMuERV-L陽性細胞の誘導に必須かどうかを検討した。その結果、TriacsinC処理によりほぼ全ての細胞でLDが消失したにも関わらず、MuERV-L陽性細胞が誘導されることを明らかにした。このことから、ES細胞からMuERV-L陽性細胞の誘導には、LD生成が必須ではないことを示した。ES細胞から誘導されたMuERV-L陽性細胞には約4割がLDを有していることから、今後、MuERV-L陽性細胞に形成されるLDが遺伝子発現に影響を及ぼすかどうかを明らかにしていく予定である。

ES cells, blastoderm cells and embryonic cells in vitro are not pluripotent. Recent studies have reported that ES cells are very low in specificity and therefore have a high level of ERV-L. The results showed that the cell population had the potential to grow in the early stages of preimplantation embryo transfer, and the cell mass had the potential to grow in the early stages of embryo transfer. The purpose of this study is to develop methods for visualizing MuERV-L positive cells and for inducing MuERV-L positive cells to contain true totipotent cells. This year, lipid component staining was successfully used to visualize oocyte specific structures in MuERV-L positive cells. 2 cells were visualized and the ERV-L positive cells were visualized In addition, the inhibition of lipid synthesis by Triacsin C in MuERV-L positive cells was investigated. The results of TriacsinC treatment showed that LD disappeared and MuERV-L positive cells were induced. The induction of ES cells and the generation of LD cells are necessary. MuERV-L positive cells were induced by ES cells in about 4 weeks, and the effects of LD on the development of MuERV-L positive cells in the future were determined.