SIFD病態解明のためのTRNT1機能解析

TRNT1 功能分析阐明 SIFD 病理学

• 批准号: 21K07836
• 负责人: 長森 恒久
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K07836/
• 关键词: TRNT1; SIFD; 小胞体ストレス; B細胞性免疫不全; 形質細胞

①患者線維芽細胞において、Tunicamycin誘導小胞体ストレスの程度を見た。健常ヒト線維芽細胞に比して、spliced XBP1 mRNA発現亢進とウェスタンブロットでのリン酸化IRE1aの増加を確認した。②患者細胞ではTRNT1蛋白は健常と同じサイズで発現が低下している。またこのTRNT1発現低下はMG132の添加によって部分的に解除される。つまり、患者のR99W変異TRNT1は蛋白安定性の低下によりプロテアソーム分解を受けている事がわかった。③不死化線維芽細胞においてTRNA1をsiRNAノックダウンした。その上でTunicamycin誘導小胞体ストレスの程度を見た。spliced XBP1 mRNA発現亢進とウェスタンブロットでのリン酸化IRE1aの増加を確認した。④マウスマクロファージ系のRaw細胞にNF-kB-分泌型アルカリフォスファターゼの安定発現系を用いてTRNT1 siRNAノックダウンがNF-kB活性に及ぼす影響を見た。Tunicamycin刺激下でのNF-kB産生はノックダウンで亢進した事を確認している。次にこの患者では主にB細胞が障害を受けている。このことに関する考察を深めるために⑤T細胞の分画をフローサイトで解析した。濾胞性T細胞分画の低下を見ており、抗体産生機能の低下に可能性が示唆された。また⑤免疫グロブリンを産生するヒトハイブリドーマを培養し、これにTRNT1siRNAノックダウンをかけている。一定の発現低下を見ており、これで小胞体ストレスが他の細胞腫と比し強い影響が出るかどうかを見る。

① The degree of ストレス sizing of small cell bodies induced by Tunicamycin in patients is を as shown in た. Health often ヒ ト line d に bud cells than し て, spliced XBP1 mRNA 発 now hyperthyroidism と ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト で の リ ン acidification IRE1a の raised plus を confirm し た. ② The <s:1> <s:1> TRNT1 protein <s:1> health of the patient 's cells is usually と and じサ ズで ズで, showing a が low <s:1> て る る る る. Youdaoplaceholder6. Youdaoplaceholder0 される <s:1> TRNT1 is low, <s:1> MG132 is added によって part of に release される. つ ま り, patient の R99W - different TRNT1 は low protein stability の に よ り プ ロ テ ア ソ ー を ム decomposition by け て い る matter が わ か っ た. ③ Immortal line germ cells にお にお てTRNA1をsiRNAノッ ダウ ダウ た た た. The degree to which でTunicamycin induces ストレス <s:1> of small cells at そ そ を can be found at た. Spliced XBP1 mRNA 発 now hyperthyroidism と ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ ト で の リ ン acidification IRE1a の raised plus を confirm し た. (4) マ ウ ス マ ク ロ フ ァ ー ジ is の type Raw に NF - kB cell secretion ア ル カ リ フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ の settle 発 practice while department を い て TRNT1 siRNA ノ ッ ク ダ ウ ン が NF - kB active に and ぼ す を see た. Under the stimulation of Tunicamycin, で <s:1> NF-kB produces ノッ ノッ ダウ ダウ で で hyperactive <s:1> た events を confirm て て る る る る る. The patient で で has が main にB cell が impairment を and けて る る る. <s:1> <s:1> とに related to する examination を deep めるために⑤T cell <s:1> subdivision をフロ サ サ トで トで analysis of た た. The subdivision of filter T-cells is <s:1> low を as seen in てお, and the possibility of low antibody-producing function is に が suggesting された. ま た (5) immune グ ロ ブ リ ン を produce す る ヒ ト ハ イ ブ リ ド ー マ を し, こ れ に TRNT1siRNA ノ ッ ク ダ ウ ン を か け て い る. See certain の 発 now low を て お り, こ れ で small cell body ス ト レ ス が he の cells swollen と influence better than し い が in the る か ど う か を see る.