Development of a new treatment for lymphatic malformations with COX-2 inhibitors

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マウスの内皮細胞であるRCB1994細胞にPIK3CA変異(p.E542K)を組み込んだベクターをエレクトロポレーションで遺伝子導入した。クローニングを行い、clone 1を用いて実験を行った。Clone 1にCOX-2阻害薬を添加した培養では、Tube formationは非添加時に比べ、面積にして759% (以下、n = 12)に減少した。細胞数は41%に減少した。COX-2作用の下流にあるPGE2をPGE2測定CLIA キットで測定すると、COX-2阻害薬添加時には培養液中のPGE2は63%に減少した。HIF1αの蛋白発現はWestern blotで54%に減少した。VEGF120の蛋白発現は51%に減少した。以上より、COX-2阻害薬にはリンパ管内皮細胞において、増殖抑制効果があることがわかった。これらの作用は、PGE2―HIF1α―VEGF経路を介していることも推測された。テロメアーゼ活性はCOX-阻害薬添加時は、非添加時に比べ75%に減少した。その結果、caspase 3活性は1.85倍になった。MTTアッセイでは、COX-阻害薬添加によって27%に減少した。COX-阻害薬の作用を救済するために、PGE2またはVEFG120を添加した。PGE2添加時には、非添加時に比べ、tube formationは1.3倍、細胞数は2.2倍となった。COX-阻害薬非添加時のそれぞれ98%、88%まで回復した。VEGF120による救済では、非救済時の1.23倍にtube formationは回復し、細胞数は2.16倍になった。COX-阻害薬非添加時のそれぞれ99%と99%に回復した。以上からCOX-2阻害薬の効果は、下流のPGE2やVEGF120によって救済され、COX-2阻害薬がPGE2やVEGF120を介してtube formationを抑制していることを示している。