胎生期の脳subplate損傷における過成熟反応の解析

胚胎脑亚板损伤过成熟反应分析

基本信息

批准号：
21K07839
负责人：
松田直
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Tohoku University (2022)Mie University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は胎生期の脳subplate層に焦点を当て，炎症と虚血ストレスがsubplate層に髄鞘化の過成熟反応を誘導することを，ヒツジ胎仔を用いた動物実験で組織病理学，画像診断学，電気生理学的な解析によって証明する．同時にsubplate層の髄鞘化障害が脳回形成を変化させるかどうかも検証する．実験前にヒツジ胎仔を対照群，炎症群，低酸素群に分ける．妊娠95日に胎仔の頚動脈，羊水腔内にカテーテルを，胎仔の側頭皮下に脳波電極を留置する．またその際に低酸素群の胎仔のみ，臍帯動脈を1本結紮し，その後に胎仔を子宮内に戻して閉腹する．以後は胎仔動脈圧，羊水内圧，脳波を連続監視する．また24時間毎に動脈血血液ガス分析を行い，3群の動脈血酸素分圧，血中乳酸値を比較する．炎症群の母獣には，妊娠99日にリポポリサッカロイド 5 mgを羊水内に注入し，子宮内炎症を誘発する．妊娠105日に胎仔を剖検に供し，脳を灌流固定する．後日固定された脳はMRIを用いて検索する．またびまん性脳白質損傷とsubplate層の髄鞘化はグリア特異抗体 (NG2，O4，CNPase，PLP，GFAP) による免疫染色にLEA染色とTUNEL染色を加えて診断する．これらの結果から脳波解析においてsubplate層に特異的とされるdelta brushの異常と組織学的なsubplate層の細胞群の損傷と皮質形成異常の関連を統計学的に解析する．令和3年度は羊水中でのノイズ対策と測定精度の向上のため，皮下埋込部分での電位増幅が可能な機器を選定して胎児脳波の測定を試みた．delta brushを検出可能かどうか解析中である．令和4年度は前述のノイズ対策を行い，対照群2例の実験を実施した．しかしdelta brushの検出は困難であった．その後は脳波での連続監視を中止して炎症群2例を実施し，剖検により脳検体を採取した．

这项研究的重点是胎儿脑子板层，并证明炎症和缺血性压力通过使用绵羊胎儿的动物实验中的组织病理学，成像和电生理分析来诱导子板层中髓鞘的过度饱和。同时，我们还将检查子板层的髓鞘障碍是否改变了妇科形成。在实验之前，将绵羊胎儿分为对照组，炎症组和缺氧组。在怀孕的第95号，将导管放在胎儿的颈动脉和羊水腔中，并将EEG电极放置在胎儿的颞头皮下。目前，仅缺氧组中的胎儿被绑扎到一个脐带动脉，然后将胎儿返回子宫以关闭腹部。从那时起，不断监测胎儿动脉压，羊水压力和脑电图。还每24小时进行一次动脉血液分析，并比较三组动脉血氧和血液乳酸水平的部分压力。在炎症组的母亲中，在怀孕的第99天将5 mg的脂多糖注入羊水中，导致宫内炎症。在怀孕的第105次，胎儿患尸检，大脑被灌注。使用MRI搜索以后固定的大脑。此外，通过使用LEA和TUNEL染色，通过用神经胶质特异性抗体（NG2，O4，CNPase，PLP，GFAP）进行免疫染色来诊断子板层的弥漫性脑白质损伤和髓鞘形成。这些结果从统计学上分析了三角刷中的异常（被认为是子板层特有的，对子板层细胞群的组织学损害与皮质发育不良的关系。在2021年，为了防止羊水中的噪声并提高测量精度，我们选择了一种可以在皮下植入区域扩增潜力的装置，并试图测量胎儿脑波。我们目前正在分析是否可以检测到三角刷。在2022财年，进行了上述噪声对策，并与两个对照组进行了实验。但是，很难检测三角刷。之后，停止了连续的脑电图监测，并进行了两例炎症组，并通过尸检收集大脑标本。