ヒト樹状細胞前駆細胞株とT細胞クローンを用いた新規アレルギー感作性評価法の開発

开发使用人树突状细胞祖细胞系和 T 细胞克隆评估过敏致敏的新方法

• 批准号: 21K12256
• 负责人: 溝口 出
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K12256/
• 关键词: アレルギー感作性; 動物実験代替法; in vitro細胞共培養系; Th2細胞株; 単球細胞株; T細胞クローン; DC前駆細胞株

2022年度は、ヒト単球株CD14-MLとプライマリーT細胞を用いた2ステップ3次元DC/T共培養を用いてその有効性を検討した。まず、ヒト単球株CD14-MLを用いた3次元DC共培養系で感作性化学物質で刺激後、DC層だけを新たなウェルに載せ、アロ反応性ナイーブCD4+T細胞を反応させ、5日後リアルタイムRT-PCRにより、T細胞の活性化マーカーCD69やIL-2、Th1分化マーカーIFN-g、Th2分化マーカーIL-4などのmRNA発現を調べた。代表的な呼吸器感作性化学物質としてOrtho-phthaldialdehyde（OPA）とHexamethylene diisocyanate (HDI)、Trimellitic anhydride (TMA)を用い、代表的な皮膚感作性化学物質としてOxazolon（OXA）とFormaldehyde (FA)、2,4-Dinitrochlorobenzene (DNCB)を用いて検討した。その結果、1度に呼吸器感作性と皮膚感作性化学物質1つずつの組み合わせで、濃度を複数ふって検討したところ、いずれの組み合わせでも、皮膚感作性化学物質に比べ呼吸器感作性化学物質の刺激で、IL-4発現が増強された。次に、個々のデータより、未刺激の溶媒のみのサンプルに対する発現変動を相対値で表し計算したところ、溶媒であるDMSOの濃度の影響も見られたが、これら3種類ずつで比べても、皮膚感作性化学物質に比べ呼吸器感作性化学物質の刺激で、IL-4発現の増強がみられた。これらの結果は、溶媒のみに対する比で、1度に一緒に計らずとも複数の化学物質の評価が可能であることを示唆しており、評価系として有効である可能性が高い。

In 2022, the effectiveness of the 2022 は, ヒトトstrain CD14-ML とプライマリーT cells was co-cultured with いた2ステップ 3-dimensional DC/T. After stimulating the まず and ヒトsong ball strain CD14-ML with the sensitive chemicals of the いた 3-dimensional DC co-culture system , DC layer だ け を new た な ウ ェ ル に せ , アロ reactive ナ イ ー ブ CD4 + T cells を reactive さ せ , 5 In the future, リアルタイムRT-PCR will be used to activate T cells, マーカーCD69, IL-2, T h1 differentiation マーカーIFN-g, Th2 differentiation マーカーIL-4などのmRNA発appearを Adjustmentべた. Representative respiratory sensitizing chemicals include Ortho-phthaldialdehyde (OPA), Hexamethylene diisocyanate (HDI), Trimellitic anhydride (TMA), and typical skin sensitizing chemicals: Oxazolon (OXA) and Formaldehyde. (FA), 2,4-Dinitrochlorobenzene (DNCB) is used.その results, 1 degree of respirator sensitization and skin sensitization chemical substances 1つずつの组み合せで, concentration をplural ふって検したところ,いずれの组み合わせでも, skin-sensitive chemical substances に比べ respirator-sensitive chemicals のirritation で, IL-4発appears が Increase strength された. Second time, individual 々のデータより, unstimulated solvent のみのサンプルに対する発appear The influence of the concentration of the solvent and the concentration of DMSO is calculated based on the calculation method of the corresponding table.も见られたが, これら3 kinds of ずつで比べても, skin irritating chemicals に比べ respirator irritating chemicals のirritation で, IL-4発appears のincreasing strength がみられた.これらのRESULTは、solventのみに対する比で、1 Degreeに一丝に记らずとも plural chemical substance The evaluation is possible, the evaluation is effective, and the possibility is high.

项目成果

Chemical- and Drug-Induced Allergic, Inflammatory, and Autoimmune Diseases Via Haptenation.

• DOI: 10.3390/biology12010123
• 发表时间: 2023-01-12
• 期刊: Biology
• 影响因子: 4.2

新しい無針ジェットインジェクターによるDNAの皮内投与による抗原特異的CTLと抗体産生誘導の増強

使用新型无针喷射注射器皮内注射 DNA 增强抗原特异性 CTL 和抗体产生诱导

• 发表时间: 2021
• 作者: 井上槙也;溝口 出;片平泰弘;坂口奈央樹;寺居和宏;山下邦彦;善本隆之
• 通讯作者: 善本隆之

Protective effect of conditioned media of immortalized stem cells from human exfoliated deciduous teeth on the formation of acute pressure ulcers via HGF and VEGF.

人脱落乳牙永生干细胞条件培养基通过 HGF 和 VEGF 对急性压疮形成的保护作用。

• 发表时间: 2021
• 作者: Katahira Y;Inoue S;Hasegawa H;Watanabe A;Mizoguchi I;Yoshimoto T.
• 通讯作者: Yoshimoto T.

Conditioned medium of immortalized stem cells from human exfoliated deciduous tooth exhibit protective effect on the peripheral neuropathy of experimental autoimmune neuritis.

人脱落乳牙永生干细胞条件培养基对实验性自身免疫性神经炎周围神经病变具有保护作用。

• 发表时间: 2022
• 作者: Sakamoto E;Hasegawa H;Katahira Y;Miyakawa S;Watanabe A;Mizoguchi I;Yoshimoto T.
• 通讯作者: Yoshimoto T.

IL-27/IL-35共通サブユニットEBI3によるシャペロン分子カルネキシンを介したIL-23Raの新しい蛋白質発現安定化機構

IL-27/IL-35共同亚基EBI3的伴侣分子钙联蛋白介导的IL-23Ra新型蛋白表达稳定机制

• 发表时间: 2021
• 作者: 溝口 出;井上槙也;長谷川英哲;片平泰弘;善本隆之
• 通讯作者: 善本隆之