Causative effect of phosphate groups on the allergenicity of casein components: Improvement of diagnostic accuracy for milk allergy.

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本研究では、カゼインホスホペプチド（CPP）及びカゼインを脱リン酸化することで抗体結合能及びアレルゲン性が変化するかどうかを検討することを目的とした。令和４年度は、CPP及びカゼインをアルカリホスファターゼにより脱リン酸化処理させた試料を用いて抗体結合能を解析した。試料の脱リン酸化の程度は、Phos-tag SDS-PAGEにて確認した。脱リン酸化されたことを確認した試料を用いて阻害ELISAを行った。その結果、anti-casein rabbit IgG、牛乳アレルギー患者血清中IgEともに、脱リン酸化により抗体結合能が低下した。また、anti-casein rabbit IgGにおいて、試料の脱リン酸化の程度が大きいほど抗体結合能が低下した。さらに、エピトープとして重要な領域だと仮説だてたSSSEEを含むアミノ酸配列の合成ペプチドをリン酸基の有るものと無いもので作製し、ドットブロット及び阻害ELISAにて抗体結合能を解析した。その結果、リン酸基のあるペプチドで反応が強く、リン酸基のないペプチドでは反応がほとんどみられなかった。これらの結果から、カゼイン及びCPPの抗体反応にはアミノ酸配列中のSSSEEのリン酸基が重要な役割を果たしていることが示唆された。令和５年度は、上記の実験について、耐性獲得患者血清や遷延するアレルギー患者血清のIgG4抗体を用いて同様の解析を試みる。さらに、カゼインを食品加工することで脱リン酸化できないか検討し、乳加工食品の低アレルゲン化を目指す。