可塑性の制御による固形癌の革新的治療法の開発

通过控制可塑性开发实体瘤的创新治疗方法

基本信息

批准号：
21K19568
负责人：
赤松秀輔
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Nagoya University (2022)Kyoto University (2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19568/
关键词：
前立腺癌神経内分泌前立腺癌可塑性神経内分泌化固形癌

项目摘要

新規神経内分泌前立腺癌(NEPC)細胞株KUCaP13にAREluc(androgen response element luciferase)を導入したKUCaP13_ARElucとさらにARを強制発現させたKUCaP13_AREluc_ARを用いて96well plateでluciferase assayを行ったところ、KUCaP13_AREluc_ARでアンドロゲンを加えた細胞のみ発光を認めた。このことから、KUCaP13においてARElucによりAR活性を評価できることを確認した。続いて本学の「創薬拠点コアラボ」が保持する約1600種類の薬剤を用いてdrug screeningを行った。陰性コントロールの発光度を基準にcut offを定め、30種類の化合物をヒット化合物として同定した。今後は2nd screeningとして、偽陽性の除外と妥当性の検証を行う。具体的には先のヒット化合物を濃度をふった上でluciferase assayを行い、アンドロゲンを加えない陰性コントロールも作成し検証する。偽陽性でなかった化合物についてはqPCRやwestern blottingにおいてARやその下流であるKLK3などの発現に変化がないか検証する。候補化合物が複数の場合はそれらの組み合わせについても評価する。また、各化合物が既存のNEPC細胞株NCI-H660でも効果を示すか確認する。

当使用KUCAP13_ARELUC进行萤光素酶测定时，该测定法（曾与AreLuc（雄激素响应元件荧光素酶）和KUCAP13_ARELUC_AR一起引入，它们被迫表达AR，仅使用KUCAP13_ARELUC_AR，只有Kucap13_areLuc_ar，只有与Kucap13_areLuc_aremensence waysmentimence and androgen添加的细胞。由此，可以证实可以通过ARELUC在KUCAP13中评估AR活性。接下来，我们使用大学的“考拉实验室”拥有的大约1,600种药物进行了药物筛查。根据阴性对照的发射度确定切断，并将30种类型的化合物确定为HIT化合物。从现在开始，作为第二次筛选，将排除和验证误报。具体而言，上述HIT化合物被应用于浓度，然后进行荧光素酶测定，以创建和验证不添加雄激素的阴性对照。对于不是假阳性的化合物，我们研究了使用qPCR或Western blotting在下游的AR和KLK3的表达有任何变化。如果有多种候选化合物，则还评估了这些化合物的组合。此外，可以证实每种化合物是否还对现有的NEPC细胞系NCI-H660产生有效影响。