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特発性大腿骨頭壊死症に対するMuse細胞を用いた革新的治療法の開発

开发利用 Muse 细胞治疗特发性股骨头坏死的创新治疗方法

基本信息

批准号：
21K19924
负责人：
山田宏
金额：
$ 3.99万
依托单位：
Wakayama Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

ステロイド性大腿骨頭壊死動物モデルの作成は、ラットに炎症状態の誘因となるToll-like receptor 4のリガンドであるLipopolysaccaride (LPS)とMethylprednisolone (MPSL)を投与することで行われた。ラット種や週齢数を変更して実験を継続したが、いずれも一定数で大腿骨頭の骨化障害がみられた。大腿骨頭壊死動物モデルの安定した供給の阻害因子となっているラット骨化障害への効果的な対策は現在のところ見つかっていない。骨化障害を認めないラットでは、大腿骨頭壊死の発生を認めた。動物モデルの作成と並行して、Muse細胞の単離手技の習得も行った。Lonza社より骨髄由来間葉系幹細胞を購入し、low glucose DMEM、Human FGF2、fetal bovine serumを用いて培養した。培養した骨髄由来間葉系幹細胞を、トリプシンで処理し、Muse細胞の膜表面に特異的に存在する糖蛋白のSSEA－３を一次抗体で標識し、次に２次抗体としてFITCで標識した。標識した間葉系幹細胞を、フローサイトメトリーを用いて、FITC強度でMuse細胞と非Muse細胞に分離した。分離したMuse細胞を限界希釈し、poly-HEMAコート処理をしたDishに播種、培養し、クラスターの出現を確認した。また、先行実験では、IVIS imaging systemを使用し、Akaluc遺伝子を導入したMuse細胞の生体内動態を観察することに成功した。さらに、ラットの大腿骨を透明化することに成功し、ライトシート顕微鏡で撮影することで、標識されたMuse細胞の大腿骨頭内での分布が明らかになる可能が示唆された。

The inflammatory state of TLR4 is induced by Lipopolysaccaride (LPS) and Methylprednisolone (MPSL) in the development of TLR4 in animals with acute thigh bone disease. The number of times the thigh bone is broken Thigh bone damage to animal stability and supply of factors and effects of prevention and control measures The bones of the thigh are broken and the bones are broken. The animal model is constructed in parallel, and the Muse cell model is acquired in parallel. Lonza Corporation purchased mesenchymal stem cells, low glucose DMEM, Human FGF2 and fetal bovine serum. Cultured cells were identified by primary and secondary FITC antibodies to the glycoprotein SSEA-3, which was specifically present on the membrane surface of Muse cells. Identification of mesenchymal stem cells, FITC intensity, Muse cells and non-Muse cells Isolation of Muse cells is limited by the presence of poly-HEMA cells. The IVIS imaging system was successfully used to detect the in vivo dynamics of Muse cells using Akaluc gene. The distribution of Muse cells in the thigh bone may be revealed by the successful transparency of the thigh bone and microscopic imaging.