Membranassoziierung, Aufbau und Funktion mitochondrialer Nucleoide

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Ziel dieses Projektes ist die Charakterisierung der Verankerung mitochondrialer Nucleoide (mtDNA/Protein-Komplexe mit einer Masse >100 MDa) in der mitochondrialen Innenmembran, die massenspektrometrische Analyse der Proteinzusammensetzung mitochondrialer Nucleoide und schließlich die Aufklärung der Funktion der identifizierten Proteinkomponenten, speziell für die Regulation des mitochondrialen Stoffwechsels und der nucleo-mitochondrialen Wechselbeziehungen.Ausgangspunkt ist die genetische Markierung potentieller Nucleoid-Ankerproteine in S. cerevisiae. Nach Isolierung hochreiner Mitochondrien werden daraus mtDNA-haltige schwere Membranen isoliert, aus denen mit Hilfe der anfangs eingeführten tags die mtNucleoide isoliert werden. Diese riesigen Partikel werden dann schrittweise in kleinere Fragmente zerlegt, mit neuen Trennmethoden isoliert und massenspektrometrisch analysiert.