Development of highly accurate genome editing tools aimed at creatinon of modality for gene therapy

开发高精度基因组编辑工具，旨在创建基因治疗模式

• 批准号: 22K04837
• 负责人: 迫野 昌文
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: University of Toyama
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K04837/
• 关键词: ゲノム編集; TALEN

ゲノム編集の安全性向上には、一塩基の違いを正確に区別可能なレベルのゲノム編集技術が不可欠であり、ターゲット配列の厳密認識を実現するDNA結合タンパク質の構築が求められる。特に一塩基変異に伴う遺伝子疾患は多くの指定難病に見られ、ゲノム編集に基づく遺伝子修正は有効な治療法として期待できる。しかし、一塩基の違いを厳密に区別できるゲノム編集法はいまだなく、現在の技術ではターゲット細胞だけでなく正常細胞も編集対象になる危険性がある。したがって、高正確なDNA認識を実現することは、遺伝子治療の安全性向上とともに、新しい難病治療法へと発展することが期待される。本研究で用いるTALEのプラスミド設計とタンパク質発現系構築を行った。KRAS遺伝子、WRN遺伝子の一塩基変異ホットスポットをターゲット配列として選択し、TALE発現プラスミドを設計した。この時、ターゲットDNAとのミスマッチの部位、種類も併せて検討し、解離定数の差が大きくなる組み合わせの最適化を検討した。野生型KRAS配列を認識するTALEは、1塩基変異型配列DNA（mutGTT）と相互作用することが解析より示された。この結果は、TALEは1塩基の違いをほとんど区別できず、正常配列と同等として分子認識することを表している。そこで、連続した2塩基が異なるTALEを作製し同様の解析を行った。DNA配列とのミスマッチが2塩基連続した場合、DNAとの相互作用は大きく低下した。2塩基連続のミスマッチによる認識能低下は、正確な配列認識を持つゲノム編集ツールの開発に有用であると判断した。

Compiling の ゲ ノ ム security upward に は, a salt base の violations い を に differences may have a correct な レ ベ ル の ゲ ノ compiling technical が owe ム で あ り, タ ー ゲ ッ ト match column の 厳 close know を be presently す る dna-binding タ ン パ ク qualitative の build が o め ら れ る. A salt base - different に に, with traces of う 伝 は child disease more く の specified difficult disease に see ら れ, ゲ ノ compiling に ム base づ く heritage 伝 son fixed は unseen な therapy と し て expect で き る. し か し, a salt base の violations い を 厳 dense に difference で き る ゲ ノ compiling method ム は い ま だ な く, now の で は タ ー ゲ ッ ト cells だ け で な く も normal cells arranged like に seaborne な る dangerous 険 sex が あ る. し た が っ て, high right know を な DNA be presently す る こ と は upward, but 伝 safety の と と も に, new し い difficult disease therapy へ と 発 exhibition す る こ と が expect さ れ る. In this study, で used で るTALE プラス プラス ド ド to design the とタ パ パ パ particle distribution system and construct を row った. Traces of traces of KRAS 伝, WRN 伝 son の a salt base - different ホ ッ ト ス ポ ッ ト を タ ー ゲ ッ ト match column と し て sentaku し, by Tate 発 now プ ラ ス ミ ド を design し た. こ の, タ ー ゲ ッ ト DNA と の ミ ス マ ッ チ の parts and も and せ て beg し 検, dissociation constant の bad が big き く な る group み close わ せ の optimization を beg し 検 た. Wild-type KRAS coordination を understanding するTALE よ, 1-salt variant coordination DNA (mutGTT) と interaction する よ とが analysis よ された shows された. こ の results は, by Tate は 1 salt base の violations い を ほ と ん ど difference で き ず, normal match column と equal と し て molecular recognition す る こ と を table し て い る. そ こ で, even 続 し た 2 salt base が different な る by Tate を cropping し with others in line analytical を の っ た. In the case of DNA coordination と <s:1> ス ス ッチが ッチが2 basoly-linked 続 た, the DNAと <s:1> interaction is <s:1> large く く low た た. 2 salt base even 続 の ミ ス マ ッ チ に よ る can lower は, correct な match column know を hold つ ゲ ノ compiling ツ ム ー ル の open 発 に useful で あ る と judgment し た.

项目成果

Production of pentaglycine-fused proteins using Escherichia coli expression system without in vitro peptidase treatment

使用大肠杆菌表达系统生产五甘氨酸融合蛋白，无需体外肽酶处理

• DOI: 10.1016/j.pep.2022.106068
• 发表时间: 2022
• 期刊: Protein Expression and Purification
• 影响因子: 1.6
• 作者: Sakono Masafumi;Oshima Tatsuki;Iwakawa Takako;Arai Ryoichi
• 通讯作者: Arai Ryoichi

ER Endogenous Protein Complexed with Lectin Chaperones Calnexin/Calreticulin

内质网内源性蛋白与凝集素伴侣钙联蛋白/钙网蛋白复合

• DOI: 10.4052/tigg.2119.1e
• 发表时间: 2022
• 期刊: Trends in Glycoscience and Glycotechnology
• 影响因子: 0.3
• 作者: Sakono Masafumi