Development of Caribbean ciguatoxin-specific antibodies for prevention and treatment of ciguatera

カリブ海型シガトキシン(C-CTX)は，米国大西洋やカリブ海域におけるシガテラ食中毒の主要原因毒素である。この地域におけるシガテラの予防には、魚類からのC-CTXの微量検出法を確立することが必要であるが、そのためにはC-CTXを特異的に認識する抗体の作製が必須である。本研究では、低分子ハプテンを免疫することによるC-CTXを特異的に認識する抗体の作製およびこれを用いた微量検出法の開発を目的とする。本年度は、以下の項目について検討した。これまでの研究により、5環性ハプテンを合成、免疫することによって獲得したモノクローナル抗体は、遊離のハプテンには強く結合する抗体は得られていない。その理由として、リンカー部への結合の寄与が大きいためと考えられたため、リンカー部をハイドロカーボンとしたハプテンを新たに設計、合成した。合成したハプテンをキャリアタンパク質と縮合して抗原として免疫した。3回免疫後のマウスより脾臓を摘出し、脾臓細胞とミエローマ細胞とを電気細胞融合法により細胞融合して、ハイブリドーマを作製した。その結果、ハプテン-BSAを認識するモノクローナル抗体を50種以上獲得した。これらモノクローナル抗体について、遊離のハプテンを用いた阻害実験を行ったところ、２５H8は遊離のハプテンにKd=460 nMで結合することが明らかとなった。今後、25H8を大量培養し、C-CTXの高感度検出を検討する。

カリブ海型シガトキシン(C-CTX)は，米国大西洋やカリブ海域におけるシガテラ食中毒の主要原因毒素である。この地域におけるシガテラの予防には、魚類からのC-CTXの微量検出法を確立することが必要であるが、そのためにはC-CTXを特異的に認識する抗体の作製が必須である。本研究では、低分子ハプテンを免疫することによるC-CTXを特異的に認識する抗体の作製およびこれを用いた微量検出法の開発を目的とする。本年度は、以下の項目について検討した。これまでの研究により、5環性ハプテンを合成、免疫することによって獲得したモノクローナル抗体は、遊離のハプテンには強く結合する抗体は得られていない。その理由として、リンカー部への結合の寄与が大きいためと考えられたため、リンカー部をハイドロカーボンとしたハプテンを新たに設計、合成した。合成したハプテンをキャリアタンパク質と縮合して抗原として免疫した。3回免疫後のマウスより脾臓を摘出し、脾臓細胞とミエローマ細胞とを電気細胞融合法により細胞融合して、ハイブリドーマを作製した。その結果、ハプテン-BSAを認識するモノクローナル抗体を50種以上獲得した。これらモノクローナル抗体について、遊離のハプテンを用いた阻害実験を行ったところ、２５H8は遊離のハプテンにKd=460 nMで結合することが明らかとなった。今後、25H8を大量培養し、C-CTXの高感度検出を検討する。