Evaluation and application of binding ability between mycotoxin and lactic acid bacteria cell wall components using kinetic analysis.

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目的：アフラトキシン（AF）は、天然物で最も強力な発がん物質として知られている。AFは主にとうもろこしなどの食品を汚染し、自然に体外に排出されず体内に蓄積するといわれている。近年野菜由来のある種の乳酸菌が食品中のAFと結合し菌体とともに体外へ排出することが明らかにされているが、それらの具体的な結合メカニズムは解明されていない。そこで本研究ではきゅうり由来乳酸菌(きゅうり由来菌、Lactcoccus lactis subsp. Lactis NCDO 604T)の生菌、熱処理死菌体および酸処理死菌体を用いて、AFとの結合様式を表面プラズモン共鳴法により明らかにすることを目的とした。さらに結合形態について考察を行った。実験方法：乳酸菌は、常法で培養したものを生理食塩水で洗浄したもの（生菌）、オートクレーブで121℃、15分熱処理したもの（熱処理死菌体）、pH 2の塩酸溶液に2時間暴露させたもの（酸処理死菌体）を作成した。結合能の測定は、乳酸菌とAFを試験管内で1時間振とうする方法（バッチ法）とカビ毒のリガンドを用いて直接的にカビ毒との結合を測定する方法（表面プラズモン共鳴法、フロー法）を比較検討した。カビ毒リガンドとして市販品である牛血清アルブミン(BSA) -AFM1、オボアルブミン-デオキシニバレノール（OVA-DON）を用いた。結果及び考察：SPRを用いた測定では、生菌はBSA-AFM1に強い結合がみられ、OVA-DONには結合しなかった。熱処理及び酸処理死菌ではいずれのリガンドにも結合がみられなかった。一方バッチ法では生菌死菌とも70％程度の結合が見られた。この結果から、死菌は沈殿を伴うバッチ法ではAFは結合するが、フロー状態では結合しない、すなわち、流動的な体内での条件では生菌のみが結合能を有する可能性が示唆された。