休眠状態からの覚醒を利用した食中毒菌・リステリアの新規分離法開発

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これまでの研究成果として過酸化水素に曝露されたリステリアは曝露時間に依存して寒天培地上でのコロニー形成能が低下し、特に長時間の曝露処理によってピルビン酸添加寒天培地のみでコロニーを形成するような増殖性状にをもつといった知見を得ている。本年度は他の亜致死的（sublethal）条件に曝露したリステリアの増殖性状の変化を解析した。リステリアは食肉からの分離株を用いた。常法によって培養し、遠心操作によって集菌後、3,000万～4,000万 cfu/mLに調整して浮遊した。亜致死的条件への曝露条件としては高温（50℃、55℃、60℃）および低pH（塩化水素で3.0に調整）とした。曝露後に浮遊液を適宜希釈して2種類の培地に接種した。1つはリステリアの培養で多用される培地（TSAYE）、もう1つはピルビン酸を添加したTSAYE（TSAYE-PYR）を用いた。接種してから5日後まで定期的にコロニーの出現を観察し、両培地で得られたコロニー数の比較によってピルビン酸のストレス曝露を受けた菌のコロニー形成に対する影響を解析した。高温曝露のうち、50℃および55℃でTSAYE-PYRで得られるコロニー数が有意に多い成績が得られた一方、60℃では2つ培地で得られるコロニー数に有意な差はみられなかった。一方、低pHへの曝露では、2つの培地間でコロニー数に差はみられなかった。ピルビン酸の作用として、培地における過酸化水素が産生を抑制する作用をもつことが報告されている。今回の成績から、高温曝露によって過酸化水素感受性の損傷菌の出現が考えられた。一方、低pHでは異なる性状をもつ損傷菌が生じている可能性が考えられ、曝露要因によって多様な性状をもつ損傷菌の出現が示唆された。