F1クローン系統育種基盤形成への画期的アプローチ －倍加半数体の量産技術の改良－

形成F1克隆系育种基础的创新方法 -双单倍体批量生产技术的改进-

• 批准号: 22K05838
• 负责人: 小林 徹
• 金额: $ 1.83万
• 依托单位: Kindai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05838/
• 关键词: 倍加半数体; 染色体操作; 雌性発生; 卵割阻止; 異種刺激処理のコンビネーション; 中心小体; ホモ接合; 同型遺伝子系統; 複数回高温刺激処理

雌性発生ダブルヒートショックホンモロコ卵への低温処理を試み生存性への影響を調べた。先行研究で通常発生卵に高温処理と低温処理を組み合わせることで高温処理を単一的に施すことにより、4倍体の収量が増えるとの報告がある。そこでこの技法を、ダブルヒートショックを施した雌性発生卵に施し、発生成績や倍数化率への影響を調べた。人工精漿で100倍に希釈し紫外線を照射した精子で授精した卵を20℃の飼育水を満たした水槽に撒き、6枚のすりガラスに付着させた。このうち1枚は雌性発生対照区(GC)とし、残りの5枚を40.5℃の高温に15分間隔でにさらした。このうち1枚(HS、高温処理のみ)を除き、残りの4枚は2回目の高温処理の直後から0～0.3℃の冷水に20分、40分、60分、80分間それぞれさらした。これらの1日後生存率、孵化率、孵化仔魚の形態および倍数性を判定した。また、各孵化仔魚の8つのマイクロサテライト遺伝子座の遺伝子型を調べ、雌性発生および卵割阻止の成否を判定した。孵化率は通常受精(IC)で64.7％、GCは51.1％、HSでは17.3％であった。低温処理を加えた実験区の孵化率は20分区4.8％、40分区3.3％、60分区1.3％、80分区0.7％であり、低温処理の延長につれ孵化率が低下した。正常形態を示す孵化仔魚の割合はICで97.3％、GCは4.3％、HSでは87.1％、20分区100％、40分区91.7％、60分区100％、80分区100％であり、HSより低温処理区の正常仔魚の割合は増加した。二倍体の割合はICで97.7％、GCは4.3％、HSで93.3％、20分区100％、40分区100％、60分区100％、80分区100％であった。処理区のホモ接合個体の割合はHS90％に対し、すべての低温処理区で100％であった。このことから、用いる低温処理強度の緩和を検討すべきと考えられた。

The effect of low temperature treatment on survival of female eggs was studied. In the previous study, the combination of high temperature treatment and low temperature treatment was used to increase the yield of tetraploids. The effect of different techniques on the female egg production and the rate of multiplication of egg production was studied. Artificial seminal plasma is irradiated with ultraviolet rays at 100 times, sperm is inseminated, eggs are incubated in water at 20℃, and 6 eggs are collected. 1 female reproductive zone (GC) and 5 female reproductive zones (GC) at 40.5℃ and 15 minutes intervals 1 piece (HS, high temperature treatment), 4 pieces (HS, high temperature treatment), 2 pieces (HS, high temperature treatment), 0~0.3℃, cold water, 20 minutes, 40 minutes, 60 minutes, 80 minutes). 1 day survival rate, hatchability, morphology and ploidy of hatchling larvae were determined. 8. To determine whether or not to adjust the genetic type of each larva, female reproduction and egg cutting prevention. Hatching rate is usually fertilized (IC)<$64.7%, GC <$51.1%, HS <$17.3%. The hatching rate of 20-zone, 40-zone, 60-zone, 80-zone was 4.8%, 3.3%, 1.3%, 0.7% respectively. The hatching rate of 20-zone, 40-zone, 60-zone, 80-zone was lower than that of 20-zone, 3.3%, 1.3%, 0.7% respectively. Normal morphology showed that IC, GC, HS, 20, 40, 60, 80 of hatching larvae increased by 97.3%, 4.3%, 100%, 91.7%, 100% and 100% respectively. The diploid division IC is 97.7%, GC is 4.3%, HS is 93.3%, 20 division 100%, 40 division 100%, 60 division 100%, 80 division 100%. In the treatment zone, the bonding of the individual joints is HS 90%, and in the low temperature treatment zone, it is 100%. This is the first time that we've seen this.