サンゴ共生藻の増殖制御に関与する低温ショックドメインタンパク質の機能解析

参与珊瑚共生藻生长控制的冷休克结构域蛋白的功能分析

• 批准号: 22K05837
• 负责人: 吉原 静恵
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05837/
• 关键词: cold shock protein; 褐虫藻; 転写因子; 低温ショックドメイン

研究代表者は、褐虫藻（Breviolum minutum, Bm）の遺伝子発現解析から、転写因子cold shock protein (CSP)が褐虫藻の増殖促進に関わる可能性を示唆する結果を得た。本研究では、2種類のBmCSP（BmCSP1、BmCSP2）による増殖促進の分子機構を明らかにすることを目的とする。2022年度、以下3つの計画を立て、実施した。①BmCSPタンパク質の大腸菌発現系構築と核酸結合解析の実施、②BmCSPを発現するシロイヌナズナの作出、③BmCSPの核酸結合領域（cold shock domain, CSD）をシロイヌナズナCSP3 (AtCSP3)のCSDと置換したAtCSP3_BmCSD（AtCSP3_BmCSD1）を発現するシロイヌナズナの作出計画①：BmCSP1タンパク質（282 amino acids）は、タグなしでは大腸菌で発現しなかったが、Glutathione S-transferase (GST, 226 aa)融合タンパク質として発現、精製することができた。2021年度に実施したChIP-seq解析から見出したBmCSP1の結合標的配列（12 baseから成る10種類）の配列を合成し、結合活性を調べた。現在、1種類の1本鎖DNAと結合することを確認した。計画②：BmCSP1を35Sプロモーターの下で高発現するプラスミドを作成し、アグロバクテリウム方を用いてシロイヌナズナCSP3欠損株（Atcsp3）に導入した。現在、薬剤耐性の獲得を指標として、形質転換体の選抜を行っている。計画③：BmCSP1のCSDをもつAtCSP3を35Sプロモーターの下で高発現するプラスミドを作成し、アグロバクテリウム方を用いてシロイヌナズナCSP3欠損株（Atcsp3）に導入した。現在、薬剤耐性の獲得を指標として、形質転換体の選抜を行っている。

Works represent は, brown algae (Breviolum minutum, Bm) の heritage 伝 son 発 now parse か ら, planning to write factor cold shock protein (CSP) が worm in brown algae の raised colonization promote に masato わ を る possibility in stopping す た を る results. This study で は, 2 species の BmCSP (BmCSP1, BmCSP2) に よ る raised colonization promote の molecular institutions を Ming ら か に す る こ と を purpose と す る. In 2022, the following 3 を plan を was established as て and implemented as た. ①BmCSPタ <s:1> パ パ the construction of the <s:1> nucleic acid binding analysis <s:1> implementation, ②BmCSPを construction するシロ ヌナズナ ヌナズナ ヌナズナ, ③BmCSP <s:1> nucleic acid binding domain (cold shock domain) CSD) を シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ CSP3 (AtCSP3) の CSD と replacement し た AtCSP3_BmCSD (AtCSP3_BmCSD1) を 発 now す る シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ の make plans (1) : BmCSP1 タ ン パ ク mass (282 amino acids) は, タ グ な し で は coliform で 発 now し な か っ た が, Glutathione S transferase (GST, 226 aa) fusion タ ン パ ク qualitative と し て 発 now, refined す る こ と が で き た. 2021 annual に be applied し た ChIP - seq parsing か ら shows し た BmCSP1 の combined with mark with column (12 base か ら into 10 kinds る) の match column を synthetic し, combined with active を べ た. Now, 1 type of <s:1> 1 lock DNAと binding する とを とを confirming <s:1> た. Plan (2) : BmCSP1 を 35 s プ ロ モ ー タ ー の under high 発 で す now る プ ラ ス ミ ド を し, consummate ア グ ロ バ ク テ リ ウ ム party を with い て シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ CSP3 owe damage strain (Atcsp3) に import し た. Now, drug resistance <s:1> obtained を indicators と <s:1> て て, morphoplasmic 転 exchange <s:1> selected を lines って る る. Project (3) : BmCSP1 の CSD を も つ AtCSP3 を 35 s プ ロ モ ー タ ー の under high 発 で す now る プ ラ ス ミ ド を し, consummate ア グ ロ バ ク テ リ ウ ム party を with い て シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ CSP3 owe damage strain (AtCSP3) に import し た. Now, drug resistance <s:1> obtained を indicators と <s:1> て て, morphoplasmic 転 exchange <s:1> selected を lines って る る.

项目成果

褐虫藻Breviolum minutumの増殖制御に関与するcold shock proteinのChIP-seq解析

对参与微小虫黄藻生长控制的冷休克蛋白进行 ChIP-seq 分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 吉原静恵;水口洋平;豊田敦;徳本勇人
• 通讯作者: 徳本勇人

褐虫藻の増殖促進に関する遺伝子発現解析と転写因子のChIP-seq解析

虫黄藻促生长相关转录因子基因表达分析及ChIP-seq分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 長崎真治;今吉格;吉原静恵
• 通讯作者: 吉原静恵