サンゴ共生藻の増殖制御に関与する低温ショックドメインタンパク質の機能解析

参与珊瑚共生藻生长控制的冷休克结构域蛋白的功能分析

基本信息

批准号：
22K05837
负责人：
吉原静恵
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka Metropolitan University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05837/
关键词：
cold shock protein 褐虫藻転写因子低温ショックドメイン

项目摘要

研究代表者は、褐虫藻（Breviolum minutum, Bm）の遺伝子発現解析から、転写因子cold shock protein (CSP)が褐虫藻の増殖促進に関わる可能性を示唆する結果を得た。本研究では、2種類のBmCSP（BmCSP1、BmCSP2）による増殖促進の分子機構を明らかにすることを目的とする。2022年度、以下3つの計画を立て、実施した。①BmCSPタンパク質の大腸菌発現系構築と核酸結合解析の実施、②BmCSPを発現するシロイヌナズナの作出、③BmCSPの核酸結合領域（cold shock domain, CSD）をシロイヌナズナCSP3 (AtCSP3)のCSDと置換したAtCSP3_BmCSD（AtCSP3_BmCSD1）を発現するシロイヌナズナの作出計画①：BmCSP1タンパク質（282 amino acids）は、タグなしでは大腸菌で発現しなかったが、Glutathione S-transferase (GST, 226 aa)融合タンパク質として発現、精製することができた。2021年度に実施したChIP-seq解析から見出したBmCSP1の結合標的配列（12 baseから成る10種類）の配列を合成し、結合活性を調べた。現在、1種類の1本鎖DNAと結合することを確認した。計画②：BmCSP1を35Sプロモーターの下で高発現するプラスミドを作成し、アグロバクテリウム方を用いてシロイヌナズナCSP3欠損株（Atcsp3）に導入した。現在、薬剤耐性の獲得を指標として、形質転換体の選抜を行っている。計画③：BmCSP1のCSDをもつAtCSP3を35Sプロモーターの下で高発現するプラスミドを作成し、アグロバクテリウム方を用いてシロイヌナズナCSP3欠損株（Atcsp3）に導入した。現在、薬剤耐性の獲得を指標として、形質転換体の選抜を行っている。

研究者通过Zooxanthellae（Breviolum Minutum，bm）的基因表达分析获得了结果，这表明转录因子冷休克蛋白（CSP）可能参与促进Zooxanthellae的生长。这项研究旨在阐明两种类型的BMCSP（BMCSP1和BMCSP2）促进增殖的分子机制。在2022财年，制定并实施了以下三个计划。 1）BMCSP蛋白的大肠杆菌表达系统的构建和进行核酸结合分析； 2）创建表达BMCSP的拟南芥； 3）创建表达ATCSP3_BMCSD（ATCSP3_BMCSD1）的拟南芥的创建，其中BMCSP的核酸结合区域（冷休克域，CSD）被替换为Arabidopsis CSP3（ATCSP3）（ATCSP3）（ATCSP3）（ATCSP3）（ATCSP3）（ATCSP3）（ATCSP3）（1）蛋白质（1）蛋白质（exssp3）（e 1）蛋白质（exssp3）（exssp3）（bmccs）（e 1）蛋白质（1）蛋白质（e 1），没有标签的大肠杆菌，但能够表达并纯化为谷胱甘肽S-转移酶（GST，226 AA）融合蛋白。合成了BMCSP1的结合靶序列（10种碱基组成的类型）的序列，合成了2021年进行的CHIP-SEQ分析，并检查了其结合活性。已确认它与一种类型的单链DNA结合。计划2：在35S启动子下制备高度表达BMCSP1的质粒，并使用农业方法引入拟南芥CSP3缺陷菌株（ATCSP3）。当前，使用耐药性作为指标选择转化子。计划3：创建了带有BMCSP1 CSD的质粒，该质粒在35S启动子下高表达质粒，并使用农业方法引入了拟南芥CSP3缺陷菌株（ATCSP3）中。当前，使用耐药性作为指标选择转化子。