Establishment and spread of the new assay for sperm flagellar function to improve artificial insemination results in the cattle

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○ NCXs阻害剤SN-6またはPNCAs阻害剤Caloxin 2A1で処理された新鮮射出精子におけるローテーション（R）運動の発生状態の観察結果は，SERCAsだけでなくNCXsもR運動の発生を制御する[Ca2+]iの調節に機能することを示唆した。○ カリクリンA（CL-A）処理された新鮮射出精子においてR運動を伴うF-HAの発生状態を経時的に観察したところ，F-HA率が20%を越えるのに要する処理時間の違いより精子サンプルを早期型と遅延型に区分できた。またThapsigarginやOchratoxin Aを用いた実験により，両区の間に存在するSERCA活性の差異がR運動を伴うF-HAの発生速度に差を生じさせることを示した。○ PLA2阻害剤Palmityl trifluoromethyl ketoneが新鮮射出精子でのR運動およびR運動を伴うF-HAの発生状態に及ぼす影響を観察したが，PLA2がSERCAsの上流制御因子として機能することを示す結果を得られなかった。○ 凍結保存精子でのF-HAの誘起実験において以下の結果を得た。CL-Aの好適な濃度と処理時間はそれぞれ10 nMおよび1～2時間， F-HA精子の大部分の運動様式はR運動を伴う3次元運動，鞭毛運動調節因子GSK-3αはCL-A処理依存的に減少することで，精子内でのGSK-3αの低活性を不可逆的に維持，R運動を伴うF-HAの観察には浅型チャンバー（20 μm以下）は不適で，深型チャンバー（50 μm）の使用が必要○ R運動を伴うF-HAの発生を制御するCa2+チャネルを探索するため，CatSperおよびSOCの阻害実験をそれぞれHC056456およびYM-58483を用いて行い，発生制御にCatSperは機能しないが，SOCは抑制的に関与する可能性を示唆した。