精巣上体液中の精子頭部間凝集抑制タンパク質を修飾する糖鎖の特性解析

修饰附睾液中精子头聚集抑制蛋白的糖链的表征

• 批准号: 08760262
• 负责人: 原山 洋
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760262/
• 关键词: シアロタンパク質; 精巣上体; 精子成熟; 糖鎖

1.研究実績の概要:哺乳動物の精巣上体における精子の成熟変化のひとつである頭部間凝集性低下の分子機構を明らかにする目的で、精子頭部間凝集抑制タンパク質(Anti-Agglutinin:以下AAとする)を修飾する糖鎖の特性を解析し、以下の結果を得た。2.糖鎖修飾の違いがAAの精子への結合性に及ぼす影響:AAにおいて、分子不均一性が精子への結合性に大きく影響するが、この分子不均一性の原因を明らかにする目的で、精巣上体尾液(30μg)を尿素存在下で2次元電気泳動した後、レクチンブロッティング法に従ってコムギ胚芽凝集素(WGA)との反応性について調べた。その結果、精子との結合性を備える等電点5.8のスポットはWGAと反応したが、精子と結合しない等電点5.6および5.95のスポットは反応しなかった。従って、糖鎖のシアル酸化の有無が分子不均一性の一因であり、また精子への結合性に影響すると考えられる。3.修飾糖鎖の分子量測定:AAからGlycoFree-Kitを用いて糖鎖を完全に除去し、その際の分子量の変化をMALDI-TOF-Mass Spectrometric Analysisにより測定したところ、無処理のAAは分子量18900-19600においてブロードしたピークとして検出されたが、糖鎖除去後の試料は最高700小さい分子量においてシャープやピークを示した。このことから、総分子量で700以下の糖鎖がAAを修飾しており、その修飾糖鎖は多種類存在すると考えられる。4.脱シアル酸がAAの生理活性に及ぼす影響:ノイラミニダーゼ(0.5U/ml)を用いて脱シアル酸化したAAを洗浄精子浮遊液に添加し37℃で5時間インキュベートしたところ、AAの精子凝集抑制作用は若干低下する傾向を示した。

1。研究结果摘要：为了阐明降低头间聚集的分子机制，对哺乳动物的附睾的精子成熟的变化之一，分析了修改头顶聚合抑制剂蛋白（AA）的Glycans的性质，并获得了以下结果。 2。聚糖修饰差异对AA与精子结合的影响：在AA中，分子异质性对与精子的结合具有重大影响。为了阐明这种分子异质性的原因，在尿素存在下，在尿素存在下2D电泳2D电泳，然后使用lectin blotting研究了与小麦胚芽凝集素（WGA）的反应性。结果，具有5.8的等电点的斑点与精子与WGA反应，而与精子没有结合的等电点的斑点则没有反应。因此，糖链的存在或不存在是分子异质性的一个因素，被认为会影响其与精子的结合。 3。改性糖链的分子量测量：当使用糖含量糖中完全从AA中取出糖，通过MALDI-TOF-MAS频谱分析测量分子量的变化，未经处理的AA被检测到AA时，AA被检测到作为刺激的峰值和糖的峰值刺激的刺激，但在18900-19600的峰值上，刺激了18900-1900-19600的峰值， 700。因此，据信，总分子量为700或更少的聚糖会改变AA，并且有许多类型的改性聚糖。 4。脱水酸对AA生理活性的影响：与神经氨酸酶（0.5U/mL）一起使用去脱酸时，将AA添加到洗涤后的精子悬浮液中，并在37°C下孵育5小时，而精子聚集抑制AA的效果略有降低，则表现出精子聚集的降低。