Fabrication of corneal graft alternatives that maintain transparency after transplantation and establishment of a system for their evaluation

制作移植后保持透明度的角膜移植替代品并建立评估系统

基本信息

批准号：
22K06010
负责人：
田島一樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06010/
关键词：
脱細胞化角膜移植人工角膜獣医再生医療

项目摘要

難治性角膜潰瘍の治療法は角膜移植しかないが、特に犬猫においてはドナーがおらず、角膜の入手は大変困難である。そこで、ドナー不足を解消する人工角膜の作成を、脱細胞化という技術を用いて克服すべく研究を行っている。犬の角膜を入手する機会はほとんどなく、入手できた際には細胞の分離・培養を行い、in vitroの実験に供すべく準備を行っている段階である。現在、ほとんど報告のない犬の角膜上皮細胞、内皮細胞の培養には成功しており、一定の培養方法を確立することができた。更に詳細に最適な細胞培養条件を検討し、豚の脱細胞化角膜上にて培養することで、脱細胞化角膜への犬角膜細胞の接着性や接着後の動態解析を行っていく予定である。また、眼球を角膜片にし、培養液の中で組織として培養するex vivoでの培養方法を確立し、最適な培養液や培養条件の検討を行った。その結果、豚のex vivoにおける角膜上皮細胞の培養条件を一定程度確立することが可能であった。さらにその確立したex vivoの培養モデルに上皮欠損を作成し、その修復を確認することができた。上皮欠損についてはその方法や大きさを最適化し、安定的に上皮欠損モデルとその修復モデルとして確立することが可能であった。来年度以降は、この豚角膜ex vivo上皮欠損/上皮修復モデルを用いて実験を実施していくことが可能である。脱細胞化技術とex vivoの実験を組み合わせ、脱細胞化角膜上で創傷治癒の確認を行うことまで含めた実験を計画している。

角膜移植是治疗顽固性角膜溃疡的唯一方法，但没有捐助者，尤其是在狗和猫中，并且很难获得角膜。因此，我们正在进行研究，以克服人造角膜的创建，该角膜可以使用脱细胞技术解决供体短缺。很少有机会获得狗角膜，并且在可用的情况下，分离和培养细胞，并为体外实验做准备。目前，我们已经成功地培养了狗的角膜上皮细胞和内皮细胞，这些细胞很少有报道，并且我们已经能够建立某种培养方法。我们将进一步研究最佳的细胞培养条件，并通过在猪的脱细胞角膜上培养犬类角膜细胞对脱细胞角膜和动力学的粘附。此外，建立了一种在体内培养方法中，将眼球制成角膜碎片并在培养基中的组织中培养，并检查了最佳培养基和培养条件。结果，有可能在猪中建立一定程度的角膜上皮细胞的培养条件。此外，在已建立的离体培养模型中产生了上皮缺陷，并确认其修复。对于上皮缺陷，可以优化上皮缺陷的方法和大小，并且可以将它们确定为上皮缺陷及其修复模型的稳定模型。从明年开始，可以使用该离体猪角膜上皮缺陷/上皮修复模型进行实验。我们正在计划将脱细胞技术与离体实验相结合的实验，包括确认脱细胞角膜上的伤口愈合。