Analysis of mammalian survival mechanism under stressed temperature using novel mutant-HSF1 knock-in mice

利用新型突变体HSF1基因敲入小鼠分析应激温度下哺乳动物的生存机制

基本信息

批准号：
22K06044
负责人：
林田直樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

2022年度は、本研究課題の中心となる、新規の変異型熱ショック転写因子1（HSF1）のノックインマウスの作製に1年間を費やした。具体的に作製を開始したのは、熱耐性が強くなることが予想される活性型 HSF1 ノックインマウス (caHSF1-KI) と、熱耐性が弱くなると考えられる DNA 結合能欠損 HSF1 ノックインマウス (R71G-KI) の2種類である。いずれも、ゲノム編集の手法を用いて行った。caHSF1-KI については、活性型にするために除去しようとした配列が若干異なってしまったものの、1匹変異を有するマウスを得ることが出来た。除去を狙った配列はΔ221-315であったが、この1匹は5アミノ酸が残ってしまうΔ226-315の変異を有するマウスであったものの、この5アミノ酸が残っていても活性型になると予想し、このマウスの系統化を目指して交配を行ったところ、この変異を受け継ぐ次世代のマウスを得ることに成功した。この変異マウスが多数得られたため、全臓器の採取を数匹から行い、これからタンパク質およびRNAを回収して、HSF1の主なターゲット分子であるHSP70や同じHSFであるHSF2の発現の解析を行うと共に、目的である caHSF1-KI を得るため、得られたマウスを用いて、L395E変異を入れるゲノム編集を行っている。R71G-KI についても、ゲノム編集を行った産仔が得られており、現在、正しい変異が入っているかを確認中である。決して早くマウス作製が進んでいるとは言えないが、着実に進んでいるのは間違いなく、想定の範囲内で順調な結果が得られたと考えている。

在2022年，用一种新型的突变热冲击转录因子1（HSF1）制作了一年，这是本研究主题的核心。具体而言，我们开始分为两种类型的生产：活性HSF1敲击小鼠（CAHSF1-KI），预计其具有更强的耐热性，而DNA结合能力缺陷型HSF1敲击小鼠（R71G-KI）预计其耐热性较弱。所有这些都是使用基因组编辑技术进行的。对于CAHSF1-KI，尽管要去除以使其活性的序列略有不同，但我们能够获得带有一个突变的小鼠。打算去除的序列为Δ221-315，但是尽管该序列是一只小鼠，其突变为Δ226-315，剩下5个氨基酸，但我们预测即使五个氨基酸仍然存在，它也会成为一种活跃的形式，因此我们能够将这种小鼠繁殖而来，并能够遗化该群体，并可以属于我们的下一代，并能够获得该群体化的一代人。 As many of these mutant mice were obtained, all organs were collected from several animals, and proteins and RNA were collected to analyze the expression of HSP70, the main target molecule of HSF1, and HSF2, the same HSF, and to obtain the target caHSF1-KI, the mice were used to genome editing to place the L395E mutation in the mice.对于R71G-KI，还获得了基因组编辑的小牛，目前正在检查以查看是否存在正确的突变。尽管不可能说小鼠产量正在迅速发展，但我们认为进步正在稳步发展，并且我们在预期范围内取得了良好的成绩。