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Analysis of mammalian survival mechanism under stressed temperature using novel mutant-HSF1 knock-in mice

利用新型突变体HSF1基因敲入小鼠分析应激温度下哺乳动物的生存机制

基本信息

批准号：
22K06044
负责人：
林田直樹
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

2022年度は、本研究課題の中心となる、新規の変異型熱ショック転写因子1（HSF1）のノックインマウスの作製に1年間を費やした。具体的に作製を開始したのは、熱耐性が強くなることが予想される活性型 HSF1 ノックインマウス (caHSF1-KI) と、熱耐性が弱くなると考えられる DNA 結合能欠損 HSF1 ノックインマウス (R71G-KI) の2種類である。いずれも、ゲノム編集の手法を用いて行った。caHSF1-KI については、活性型にするために除去しようとした配列が若干異なってしまったものの、1匹変異を有するマウスを得ることが出来た。除去を狙った配列はΔ221-315であったが、この1匹は5アミノ酸が残ってしまうΔ226-315の変異を有するマウスであったものの、この5アミノ酸が残っていても活性型になると予想し、このマウスの系統化を目指して交配を行ったところ、この変異を受け継ぐ次世代のマウスを得ることに成功した。この変異マウスが多数得られたため、全臓器の採取を数匹から行い、これからタンパク質およびRNAを回収して、HSF1の主なターゲット分子であるHSP70や同じHSFであるHSF2の発現の解析を行うと共に、目的である caHSF1-KI を得るため、得られたマウスを用いて、L395E変異を入れるゲノム編集を行っている。R71G-KI についても、ゲノム編集を行った産仔が得られており、現在、正しい変異が入っているかを確認中である。決して早くマウス作製が進んでいるとは言えないが、着実に進んでいるのは間違いなく、想定の範囲内で順調な結果が得られたと考えている。

In 2022, the center of this research project, the new regulation of variable heat factor 1 (HSF1) and the cost of its production for one year will be increased. The specific activity of HSF1 is higher than that of HSF1 (caHSF1-KI), and the heat tolerance of HSF1 is lower than that of HSF1 (R71G-KI). In the middle of the game, you have to edit the method. CaHSF1-KI is the only one that can be removed from the active list. The first step is to make sure that you have a good understanding of the relationship between them. HSF1 main molecule HSP70 is identical to HSF2 main molecule HSF1 main molecule HSF1 main molecule HSF2 main molecule HSF1 main molecule HSF1 R71G-KI To determine the early stage of the game, the game will be played in the middle of the game, and the game will be played in the middle of the game.