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Frontier in research of meningeal macrophage opened up by tissue clearing

组织清除开辟脑膜巨噬细胞研究前沿

基本信息

批准号：
22K06443
负责人：
内田仁司
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Niigata University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06443/
关键词：
マクロファージ髄膜組織透明化 3Dイメージング

项目摘要

最近の国内外の研究から、脳を覆う軟髄膜（くも膜と軟膜）に常在する免疫細胞（マクロファージ）は、脳の恒常性や疾患に関係することが示唆されているが、その役割は十分に明らかにされていない。本研究の目的は、新たな組織透明化手法を開発するとともに、3次元イメージングと3次元組織染色法を駆使して、軟髄膜マクロファージの空間分布を特徴付けるとともに、本細胞のマーカー分子の同定を通じて、機能操作ツールを確立し、その役割を明らかにすることである。本研究は、軟髄膜の免疫学的バリア機構とその破綻による疾患の理解に繋がることが期待されるために、極めて意義深いものである。研究初年度では、研究実施計画に基づき、新たな組織透明化手法の開発（化合物スクリーニングなど）とその検証実験を進め、順調に成果を得ることができた。また、ミクログリア／マクロファージを標識する、Iba1(iCre/+);CAG-floxed STOP tdTomatoマウスの全脳イメージングに加えて、複数のマクロファージマーカー抗体（既報の軟髄膜マクロファージマーカーなど）を用いた、野生型マウス脳の3次元組織染色条件を確立させた。その結果、レポーターマウスの3次元イメージングと野生型マウスの3次元組織染色において、一致した結果を得ることができた。上記の実験に加えて、研究初年度では、複数のマクロファージマーカー抗体を用いた、ヒト剖検脳組織（大脳皮質）の透明化・3次元組織染色条件の検討実験を進めており、予備的知見を得ることができた。

Recent studies at home and abroad have shown that the soft membrane is often present in immune cells and that it is related to constant diseases. The purpose of this study is to develop new methods for tissue transparency, to characterize the spatial distribution of soft tissue, to establish the functional characteristics of the tissue. This study is aimed at understanding the mechanisms and flaws of soft tissue immunology. In the initial year of the study, the development of new tissue transparency methods (compounds) was carried out according to the implementation plan, and the results of the study were obtained. Iba1(iCre/+);CAG-floxed STOP tdTomato; 3-dimensional tissue staining conditions established for the use of multiple STOP tdTomato antibodies (both reported soft membrane). 3-D staining results In the first year of the study, the transparency of the tissue (cortex) and the staining conditions of the three-dimensional tissue were studied.