個別化医療に向けたB7-H3糖鎖と活性化T細胞によるがん細胞認識との関係の解明

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B7-H3は、T細胞の活性化を抑制するB7ファミリーに分類される糖タンパク質であり、多くの固形がんで過剰発現していることから、がん免疫療法における新たな治療標的分子として注目されている。しかしながら、生体内におけるB7-H3を介したT細胞の活性化制御機構には不明な点が多く、相互作用する相手側タンパク質であるT細胞表面上のリガンド分子や、B7-H3糖鎖の相互作用への関与は明らかとなっていない。本研究では、乳がん臨床組織検体におけるB7-H3糖鎖を明らかにし、T細胞の活性化制御機構に対するB7-H3の役割を解明する上での知見を得ることを目指している。本年度は、まず、B7-H3の選択的回収法ならびに検出法を最適化した。B7-H3に対する異なる３種類の市販抗体を入手し、リコンビナントB7-H3を用いた免疫沈降法及びウエスタンブロット条件を検討した。次に、乳がん（３種）及び大腸がん（１種）、類表皮がん（１種）、肺がん（１種）由来の細胞ライセートを用いたB7-H3のスクリーニングにより、顕著なB7-H3発現が認められる細胞株を特定し、最適化された手法によりB7-H3が選択的に回収されることを確認した。並行して、B7-H3の分析条件を最適化した。リコンビナントB7-H3を還元・カルバミドメチル化した後、トリプシン/リシルエンドペプチダーゼで消化した。得られた消化物のLC/MS/MSにより、N91およびN104/322、N215/433、N309を含む糖ペプチドが同定され、B7-H3の部位特異的な糖鎖プロファイルを明らかにした。