リソソーム膜タンパク質糖鎖のがん性変異と細胞内局在制御との関係の解明

阐明溶酶体膜蛋白糖链癌性突变与细胞内定位控制之间的关系

• 批准号: 16K18864
• 负责人: 高倉 大輔
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K18864/
• 关键词: グライコプロテオミクス; LC/MS; リソソーム; 生物物理; 糖鎖不均一性

リソソーム膜タンパク質の多くは糖鎖修飾されているが、細胞の悪性化・がん化に伴う糖鎖不均一性変化が明らかになった例は殆どない。本研究の目的は、報告者が確立したLC/MSによる糖ペプチドの網羅的解析法を用いて、リソソーム関連膜タンパク質（LAMP）の糖鎖不均一性変化と細胞内局在制御との関係を明らかにすることである。本年度は、まず、乳がん細胞株とその同系細胞株である周辺正常組織由来細胞株を用いて、LAMP-1の細胞内局在を調べた。リソソームマーカーである抗cathepsinD抗体、並びに抗LAMP-1抗体を用いた免疫蛍光抗体法で解析したところ、乳がん細胞において、リソソーム及びLAMP-1が核膜周辺に蓄積していることが確認された。そこで、両細胞株より不溶性膜画分を抽出してプロテアーゼで消化した。糖ペプチドを濃縮後、LC-MSで解析したところ、LAMP-1のAsn84、Asn103、及びAsn261に結合する糖鎖不均一性を明らかにすることができた。乳がん細胞における各部位における糖鎖変動を相関分析により評価したところ、Asn103に結合する糖鎖においては両細胞株で高い正の相関(r=0.9)を示したが、Asn84においては弱い正の相関（r=0.69）、Asn261に至っては負の相関（r=－0.32）を示した。すなわち、乳がん細胞において、Asn261に結合する主な糖鎖が高マンノース型から複合型へと変化していた。同様の顕著な糖鎖変化は、LAMP-2のAsn356に結合する糖鎖をはじめ、他のリソソーム関連タンパク質においても認められた。

リ ソ ソ ー ム membrane タ ン パ ク quality の many く は sugar lock modified さ れ て い る が, cell の 悪 sexualising · が ん change に with uneven う sugar lock - a sex change が Ming ら か に な っ た example は perilous ど な い. Purpose の this study は, reporter が establish し た LC/MS に よ る sugar ペ プ チ ド の snare the analytic method of を with い て, リ ソ ソ ー ム masato even membrane タ ン パ ク mass (LAMP) uneven の sugar lock - a sex change と bureau in the cell in the system of imperial と の masato を and Ming ら か に す る こ と で あ る. This year は, ま ず, milk が ん cell lines と そ の homologous cell lines で あ る weeks 辺 normal tissue origin cell lines を with い て の bureau in the cell, LAMP - 1 in を adjustable べ た. リ ソ ソ ー ム マ ー カ ー で あ る cathepsinD antibody, and び に LAMP - 1 antibodies を resistance with い た immune antibody method で 蛍 light parsing し た と こ ろ, milk が ん cells に お い て, リ ソ ソ ー ム and び が LAMP - 1 week of nuclear membrane 辺 に accumulation し て い る こ と が confirm さ れ た. Youdaoplaceholder0 そ で で, insoluble membrane fraction of the two cell lines よ を, <s:1> てプロテア ゼで ゼで ゼで digestion た. Sugar ペ プ チ ド を after enrichment, and resolution of LC - MS で し た と こ ろ, LAMP - 1 の Asn84, Asn103 and び Asn261 に combining す る sugar lock heterogeneity を Ming ら か に す る こ と が で き た. Each part of the breast が ん cells に お け る に お け る sugar lock - move を phase masato analysis に よ り review 価 し た と こ ろ, Asn103 に combining す る sugar lock に お い て は struck cell lines で high い masato is の phase (r = 0.9) を shown し た が, Asn84 に お い て は weak い masato is の phase (r = 0.69), Asn261 に to っ て は negative の phase masato (r =-0.32) を shows た. す な わ ち, milk が ん cells に お い て, Asn261 に combining す る な Lord sugar lock が マ ン ノ ー ス type か ら compound へ と variations change し て い た. With others in の 顕 the な sugar lock - は, LAMP - 2 の Asn356 に combining す る sugar lock を は じ め, he の リ ソ ソ ー ム masato even タ ン パ ク qualitative に お い て も recognize め ら れ た.

项目成果

グライコプロテオミクス技術による乳がん細胞糖タンパク質の腫瘍関連グリコフォーム解析

利用糖蛋白组学技术对乳腺癌细胞糖蛋白进行肿瘤相关糖型分析

• 发表时间: 2016
• 作者: 高倉大輔;吉田晴香;川崎ナナ
• 通讯作者: 川崎ナナ

乳がん細胞膜糖タンパク質の部位特異的なN-型糖鎖変化

乳腺癌细胞膜糖蛋白中位点特异性 N 聚糖的变化

• 发表时间: 2016
• 作者: 吉田晴香;高倉大輔;川崎ナナ
• 通讯作者: 川崎ナナ

乳がん細胞糖タンパク質糖鎖のミクロ不均一性変化の解析

乳腺癌细胞糖蛋白糖链的微观异质性变化分析

• 发表时间: 2016
• 作者: 高倉大輔;吉田晴香;川崎ナナ
• 通讯作者: 川崎ナナ