Rho活性化因子に対するタンパク質相互作用原理を用いた新規機能調節分子の創成

利用 Rho 激活剂的蛋白质相互作用原理创建新型功能调节分子

• 批准号: 22K06579
• 负责人: 上田 浩
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Gifu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06579/
• 关键词: RhoGEF; NCK2; SH3ドメイン; PHドメイン; PxxPモチーフ; Rho; アダプタータンパク質; タンパク質間相互作用

過去、RhoGEFの一種であるPLEKHG1のPHドメイン上に、PXXPモチーフが存在し、そのモチーフにアダプタータンパク質の一種である NCK2が結合することにより、PLEKHG1のRhoGEF活性が抑制されることを見出した。このことから、今年度は、計画に従い、まず、他の70種類存在するRhoGEFのPHドメインにPXXPモチーフを持つものが存在するかどうかを確認した。その結果、５種類のRhoGEFのPHドメイン上にPXXPモチーフが存在することがわかり、そのうちの４つについては、PLEKHG1とほぼ同様の位置（PHドメインの開始アミノ酸から数えた場合）にPXXPモチーフが存在することを確認した。それらのRhoGEFに関して、全長クローンを取得し、DH-PHドメインのみの変異体およびPXXPモチーフの変異体などの発現ベクター等を作成し、HEK293細胞において、その発現を確認するとともに、これらの野生型及び変異体が、HEK293細胞において、Rho活性化の指標であるSRF活性を上昇させることも確認した。さらに、NCK2の全長及びSH3ドメインのみを持つNCK2のN末端領域変異体の発現ベクターを用い、それぞれのRhoGEFの活性に対する影響を確かめた結果、予想通り、PLEKHG1を含む５つのRhoGEFにおいて、NCK2との共発現により、SRF活性が抑制された。このことから、予想通り、NCK2によりPHドメインにPXXPモチーフを持つRhoGEFはその活性が抑制されることが示唆された。さらに、これらのRhoGEF及びNCK2それぞれの各種変異体を用いた実験から、RhoGEFとNCK2は、このPHドメイン上のPXXPモチーフを介して相互作用していることも免疫沈降実験等から明らかにできた。

Past, RhoGEF の a で あ る PLEKHG1 の PH ド メ イ ン に, PXXP モ チ ー フ が し, そ の モ チ ー フ に ア ダ プ タ ー タ ン パ ク qualitative の a で あ る NCK2 が combining す る こ と に よ り, PLEKHG1 の RhoGEF inhibition さ が れ る こ と を shows し た. こ の こ と か ら, our は, plan に 従 い, ま ず, 70 species exist he の す る RhoGEF の PH ド メ イ ン に PXXP モ チ ー フ を hold つ も の が exist す る か ど う か を confirm し た. そ の result, 5 kinds の RhoGEF の PH ド メ イ ン on に PXXP モ チ ー フ が exist す る こ と が わ か り, そ の う ち の 4 つ に つ い て は, PLEKHG1 と ほ ぼ with others の location (PH ド メ イ ン の began ア ミ ノ acid か ら number え た) に PXXP モ チ ー フ が exist す る こ と を confirm し た. そ れ ら の RhoGEF に masato し て, span ク ロ ー ン を し, DH - PH ド メ イ ン の み の - variant お よ び PXXP モ チ ー フ の - variant な ど の 発 now ベ ク タ ー を し consummate, HEK293 cells such as に お い て, そ の 発 を now confirmed す る と と も に, こ れ ら の wild type and び 1 - が, HEK293 cells Youdaoplaceholder0 にお て, Rho activation <s:1> index である, SRF activity を increase させる と と と て confirm た. さ ら に, NCK2 の span and び SH3 ド メ イ ン の み を hold つ NCK2 の N terminal areas - variant の 発 now ベ ク タ ー を い, そ れ ぞ れ の RhoGEF の active に す seaborne る influence を か indeed め た results, to think through り, PLEKHG1 を containing 5 つ む の RhoGEF に お い て, NCK2 と の 発 now total に よ り, S RF activity が inhibits された. こ の こ と か ら, to think through り, NCK2 に よ り PH ド メ イ ン に PXXP モ チ ー フ を hold つ RhoGEF は そ の inhibition さ が れ る こ と が in stopping さ れ た. さ ら に, こ れ ら の RhoGEF and び NCK2 そ れ ぞ れ の various variations variants を with い た be 験 か ら, RhoGEF と NCK2 は, こ の PH ド メ イ ン on の PXXP モ チ ー フ を interface し て interaction し て い る こ と も immune sink be 験 etc か ら Ming ら か に で き た.

项目成果

Impaired Function of PLEKHG2, a Rho-Guanine Nucleotide-Exchange Factor, Disrupts Corticogenesis in Neurodevelopmental Phenotypes.

Rho-Guanine核苷酸交换因子Plekhg2的功能受损，破坏了神经发育表型中的皮质生成。

• DOI: 10.3390/cells11040696
• 发表时间: 2022-02-16
• 期刊: Cells
• 影响因子: 6
• 作者: Nishikawa M;Ito H;Tabata H;Ueda H;Nagata KI
• 通讯作者: Nagata KI

Hyodeoxycholic Acid (HDCA) Prevents Development of Dextran Sulfate Sodium (DSS)-Induced Colitis in Mice: Possible Role of Synergism between DSS and HDCA in Increasing Fecal Bile Acid Levels

猪去氧胆酸 (HDCA) 预防小鼠右旋糖酐硫酸钠 (DSS) 诱导的结肠炎的发生：DSS 和 HDCA 之间的协同作用在增加粪便胆汁酸水平方面的可能作用

• DOI: 10.1248/bpb.b22-00373
• 发表时间: 2022
• 期刊: Biological and Pharmaceutical Bulletin
• 影响因子: 2
• 作者: Watanabe S;Chen Z;Fujita K;Nishikawa M;Ueda H;Iguchi Y;Une M;Nishida T;Imura J.
• 通讯作者: Imura J.