Dose the SecinH3 suppress ABC transporters by a novel mechanism?

SecinH3 是否通过新机制抑制 ABC 转运蛋白？

• 批准号: 22K06746
• 负责人: 蓬田 伸
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tohoku Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06746/
• 关键词: K562; Doxorubicin耐性; P-タンパク質; 排出機能; SecinH3; ARF6; P-糖タンパク質; Sec7ドメイン阻害剤; GEF; ERMタンパク質

初めにSecinH3のP-gpの排出機能に対する用量依存性について検討したところ、SecinH3は2.7、5.4、10、15、30 μMと容量依存的に蛍光色素の排出を抑制し、IC50は約10.96 μMであった。次に、Doxorubicin耐性K562細胞（ADR）においてCytohesin2、GEP100、ARF6、ARF1の発現に違いがあるかをWestern blottingで検討した。その結果、ADRにおいてGEP100及びARF6のタンパク質の発現は増加しおり、GEP100は細胞質画分において、ARF6は膜・オルガネラ画分で顕著に増加していた。一方、Cytohesin2やARF1はADRにおいて、タンパク質の発現が低下しており、Cytohesin2は膜・オルガネラ画分において顕著に低下していた。しかしながら、これらタンパク質の発現にSecinH3は影響を与えなかった。次に、SecinH3がP-gpに直接作用し排出機能を抑制していると考え、P-gpを高発現させた昆虫培養細胞株Sf9の細胞膜vesicleを用いて蛍光色素の排出に対する影響を検討した。その結果、既知の阻害剤では100 μM（75.9％）、2 mM（38.9％）と排出を抑制したが、SecinH3は5（97.8％）、10（91.3％）、15（110.8％）、30（103.2％）μMのいずれの濃度においても蛍光色素の排出を抑制しなかった。このことから、SecinH3のP-gpへの直接作用については可能性が低いこと示唆された。P-gpの機能や発現にはERMタンパク質の関与が報告されていることから、網羅的解析で差が見られたmoesinとezrinについてmRNAの発現をリアルタイムPCRで検討した。その結果、ezrinではその変化は確認できなかったが、moesinはADRにおいて2倍以上の差が見られた。

Early め に SecinH3 の P - gp の discharge function に す seaborne る dosage dependence に つ い て beg し 検 た と こ ろ, SecinH3 は 2.7, 5.4, 10, 15, 30 microns と capacity dependent に 蛍 photopigment の discharge を し, IC50 は about 10.96 microns で あ っ た. Recently, に, doxorubicin-tolerant K562 cells (ADR) にお に て てCytohesin2, GEP100, ARF6, ARF1 were found to exhibit に violation of <s:1> がある を を をWestern blottingで検 to counteract た. そ の results, ADR に お い て GEP100 and び ARF6 の タ ン パ ク qualitative の 発 now は raised し お り, GEP100 は cytoplasm draw points に お い て, ARF6 は membrane, オ ル ガ ネ ラ draw points で 顕 with に raised し て い た. One party, Cytohesin2 や ARF1 は ADR に お い て, タ ン パ ク qualitative の 発 now low が し て お り, Cytohesin2 は membrane, オ ル ガ ネ ラ draw points に お い て 顕 with low に し て い た. <s:1> ながら, <s:1> れらタ パ パ パ パ of the occurrence of にSecinH3 を effect を and えな えな った った. に, SecinH3 が P - gp に direct action し discharge function を inhibit し て い る と え test, high P - gp を 発 now さ せ た culture cell lines Sf9 insect の membrane vesicle を with い て 蛍 photopigment の discharge に す seaborne る influence を beg し 検 た. Youdaoplaceholder0 そ result: It is known that the <s:1> inhibitor is で で 100 μM (75.9%), 2 MM (38.9%) と discharge を inhibit し た が, SecinH3 は 5 (97.8%), 10 (91.3%), 15 (110.8%), 30 (103.2%) microns の い ず れ の concentration に お い て も 蛍 photopigment の discharge を inhibit し な か っ た. The possibility of direct action of <s:1> と ら ら and SecinH3 <s:1> P-gpへ が is が low. <s:1> と と indicates された. Function of P - gp の や 発 now に は ERM タ ン パ ク qualitative の masato and が report さ れ て い る こ と か ら, poor snare analytical で が see ら れ た moesin と ezrin に つ い て mRNA の 発 now を リ ア ル タ イ ム PCR で beg し 検 た. そ の results, ezrin で は そ の variations change は confirm で き な か っ た が and moesin は ADR に お い て 2 times more than poor の が see ら れ た.