Dose the SecinH3 suppress ABC transporters by a novel mechanism?

SecinH3 是否通过新机制抑制 ABC 转运蛋白？

• 批准号: 22K06746
• 负责人: 蓬田 伸
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tohoku Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06746/
• 关键词: K562; Doxorubicin耐性; P-タンパク質; 排出機能; SecinH3; ARF6; P-糖タンパク質; Sec7ドメイン阻害剤; GEF; ERMタンパク質

初めにSecinH3のP-gpの排出機能に対する用量依存性について検討したところ、SecinH3は2.7、5.4、10、15、30 μMと容量依存的に蛍光色素の排出を抑制し、IC50は約10.96 μMであった。次に、Doxorubicin耐性K562細胞（ADR）においてCytohesin2、GEP100、ARF6、ARF1の発現に違いがあるかをWestern blottingで検討した。その結果、ADRにおいてGEP100及びARF6のタンパク質の発現は増加しおり、GEP100は細胞質画分において、ARF6は膜・オルガネラ画分で顕著に増加していた。一方、Cytohesin2やARF1はADRにおいて、タンパク質の発現が低下しており、Cytohesin2は膜・オルガネラ画分において顕著に低下していた。しかしながら、これらタンパク質の発現にSecinH3は影響を与えなかった。次に、SecinH3がP-gpに直接作用し排出機能を抑制していると考え、P-gpを高発現させた昆虫培養細胞株Sf9の細胞膜vesicleを用いて蛍光色素の排出に対する影響を検討した。その結果、既知の阻害剤では100 μM（75.9％）、2 mM（38.9％）と排出を抑制したが、SecinH3は5（97.8％）、10（91.3％）、15（110.8％）、30（103.2％）μMのいずれの濃度においても蛍光色素の排出を抑制しなかった。このことから、SecinH3のP-gpへの直接作用については可能性が低いこと示唆された。P-gpの機能や発現にはERMタンパク質の関与が報告されていることから、網羅的解析で差が見られたmoesinとezrinについてmRNAの発現をリアルタイムPCRで検討した。その結果、ezrinではその変化は確認できなかったが、moesinはADRにおいて2倍以上の差が見られた。

The primary SecinH3 P-gp excretion mechanism was dose-dependent, and IC50 was about 10.96 μ M in volume-dependent inhibition of photopigment excretion. Secondary and Doxorubicin-resistant K562 cells (ADR) were detected by Cytohesin2, GEP100, ARF6 and ARF1. The results, ADR, GEP100, GEP100, ARF6, and ARF6, the results, and the results. On the one hand, Cytohesin2, ARF1, ADR, and Cytohesin2 films show that they are low, and the pictures are divided into two parts. Please tell me that the SecinH3 is different from the other. The secondary and secinH3 P-gp direct-acting excretion mechanism could inhibit the growth of insect culture cell line Sf9 and membrane vesicle of insect culture cell line by high-level P-gp assay. The results showed that 100 μ M (75.9%), 2 mM (38.9%), 10 (91.3%), 15 (110.8%), 30 (103.2) μ M, 100 μ M (75.9%), 2 μ M (38.9%), 10 (91.3%), 15 (110.8%), 30 (103.2%) μ M, 10 (91.3%), 15 (110.8%) and 30 (103.2%) μ M respectively. The possibility of instigation is low, and the possibility of instigation is low. The possibility is low. The P-gp machine is able to detect both ERM and reporting errors, the resolution of the network, the moesin response, the ezrin response, the mRNA response, the error response, the PCR failure, and the network resolution. The results of the tests, the ezrin results and the moesin ADR results confirm that the error is more than 2 times higher than that of the error.