Dose the SecinH3 suppress ABC transporters by a novel mechanism?

SecinH3 是否通过新机制抑制 ABC 转运蛋白？

• 批准号: 22K06746
• 负责人: 蓬田 伸
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tohoku Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2026-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06746/
• 关键词: K562; Doxorubicin耐性; P-タンパク質; 排出機能; SecinH3; ARF6; P-糖タンパク質; Sec7ドメイン阻害剤; GEF; ERMタンパク質

初めにSecinH3のP-gpの排出機能に対する用量依存性について検討したところ、SecinH3は2.7、5.4、10、15、30 μMと容量依存的に蛍光色素の排出を抑制し、IC50は約10.96 μMであった。次に、Doxorubicin耐性K562細胞（ADR）においてCytohesin2、GEP100、ARF6、ARF1の発現に違いがあるかをWestern blottingで検討した。その結果、ADRにおいてGEP100及びARF6のタンパク質の発現は増加しおり、GEP100は細胞質画分において、ARF6は膜・オルガネラ画分で顕著に増加していた。一方、Cytohesin2やARF1はADRにおいて、タンパク質の発現が低下しており、Cytohesin2は膜・オルガネラ画分において顕著に低下していた。しかしながら、これらタンパク質の発現にSecinH3は影響を与えなかった。次に、SecinH3がP-gpに直接作用し排出機能を抑制していると考え、P-gpを高発現させた昆虫培養細胞株Sf9の細胞膜vesicleを用いて蛍光色素の排出に対する影響を検討した。その結果、既知の阻害剤では100 μM（75.9％）、2 mM（38.9％）と排出を抑制したが、SecinH3は5（97.8％）、10（91.3％）、15（110.8％）、30（103.2％）μMのいずれの濃度においても蛍光色素の排出を抑制しなかった。このことから、SecinH3のP-gpへの直接作用については可能性が低いこと示唆された。P-gpの機能や発現にはERMタンパク質の関与が報告されていることから、網羅的解析で差が見られたmoesinとezrinについてmRNAの発現をリアルタイムPCRで検討した。その結果、ezrinではその変化は確認できなかったが、moesinはADRにおいて2倍以上の差が見られた。

Initial discharge function of SecinH3, P-gp discharge function, dosage dependence, SecinH3, 2.7, 5.4, 10, 15, 30 It inhibits the discharge of photopigments that depend on μM, and the IC50 is about 10.96 μM. Cytohesin2, GEP100, ARF6, and ARF1 are used for Cytohesin2, Doxorubicin-resistant K562 cells (ADR), and Western blotting is performed. G EP100 is divided into cytoplasmic cells, and ARF6 is divided into membrane and membrane cells. One, Cytohesin2やARF1はADRにおいて, Cytohesin2やARF1はADRにおいて、タンパクqualityの発现がlowしており、Cytohesin2は片・オルガネラ画分において顕与にlower していた.しかしながら、これらタンパク性の発 appear にSecinH3はeffectを和えなかった. Second, SecinH3 has a direct effect on P-gp and inhibits the excretion function, and P-gp has a high appearance. The cell membrane vesicle of the insect cultured cell line Sf9 was used to control the discharge of photopigment from the insect cell line Sf9. Result: Known inhibitor: 100 μM (75.9%), 2 mM (38.9%), excretion inhibition, SecinH3, 5 (97.8%), 10 (91.3%), 15 (110.8%), 30 (103.2%) μM のいずれのconcentration においても荍 のexcretion しなかった.このことから、SecinH3のP-gpへのDirect action についてはThe possibility is low and the いことshows the instigation された. There is a difference in the analysis of P-gp's function and function, ERM's quality, and report.が见られたmoesinとezrinについてmRNAの発成をリアルタイムPCRで検した.そのRESULT, ezrinではその変化はconfirmationできなかったが, moesinはADRにおいて 2 times or more の difference が见られた.