新規レポーターマウスを用いたストレスによる免疫修飾機構の解明

使用新报告小鼠阐明应激诱导的免疫修饰机制

• 批准号: 22K07009
• 负责人: 有村 裕
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Nippon Veterinary and Life Science University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07009/
• 关键词: 心理的ストレス; 免疫応答; レポーターマウス

心理的ストレスがどのように免疫系に影響をもたらすか、そのメカニズムをより深く理解するために、最近、私達はストレスで発現が誘導される遺伝子にGFP（緑色蛍光タンパク）をつないだ発現レポーター（ストレス可視化）マウスを作出した。まず、このマウスにストレスを負荷し、実際にGFP発現が増強するか検討した。Ddit4遺伝子にGFPを導入（knock in: KI）したマウス（Ddit4-KI）を利用して以下の方法で実験を行った。(1)まず、マウスのストレス負荷後に４つのタイミングで末梢血細胞を採取してGFP発現をフローサイトメーター（FACS）で測定した。①ストレス負荷直後、B細胞では平均蛍光強度（MFI）が増加傾向を示した。②ストレス後に3時間放置すると、白血球全体では減少傾向であった。③同じく24時間放置後は白血球全体、T細胞、B細胞でMFIが増加傾向であった。④ストレス負荷を2回かけた後では、T細胞は変化が乏しかったが、B細胞はMFIが増加した。GFPのMFIの増加率は、T細胞、B細胞では拘束直後に上昇し、3時間後に減少し、24時間経過後に再び上昇する傾向が見られた。これらの結果からGFPの変動の程度は白血球の種類によっても異なるが、測定は拘束の24時間後が最も適していると考えられた。(2)またタンパク発現をウエスタンブロットで測定すると、解除直後にGILZのみ増加が見られた。GFPはmRNA発現にばらつきが見られたが、タンパク質発現は解除直後に微増していた。(3)さらに脾臓の凍結切片を用いてGFP発現細胞を検出することを試みた。その結果、固定が１時間では不十分であり、４時間では細胞が染まりにくく、２時間でGFP、T細胞共に染色可能と考えられた。引き続きタンパク質発現やGFP染色の条件を検討中である。

Psychological ス ト レ ス が ど の よ う に immune system に influence を も た ら す か, そ の メ カ ニ ズ ム を よ り deeper understanding す く る た め に, recently, the private は ス ト レ ス で 発 now が induced さ れ る posthumous son 伝 に GFP (light green 蛍 タ ン パ ク) を つ な い だ 発 now レ ポ ー タ ー (ス ト レ ス visual マ ウ ス を make し た. Youdaoplaceholder0, <s:1> ウスにストレスを ウスにストレスを ウスにストレスを load ウスにストレスを, actual にGFP occurrence が enhancement する 検 検 discussion on 検 た. Ddit4 posthumous son 伝 に GFP を import (if in: KI) し た マ ウ ス (Ddit4 - KI) を using し て の way below で be 験 を line っ た. (1) ま ず, マ ウ ス の ス ト レ ス load after に 4 つ の タ イ ミ ン グ で peripheral blood cells を take し て GFP 発 now を フ ロ ー サ イ ト メ ー タ ー (both FACS) determination of で し た. ① After ストレス loading, the で で average 蛍 light intensity (MFI) of B cells tended to increase が, which showed that を た た. ②ストレス followed by に for 3 hours, すると was placed, and the overall white blood cell count tended to で で decrease であった. ③ After being placed for 24 hours at the same time as じく, the total white blood cells, T cells and B cells でMFIが tended to increase であった. ④ After ストレス loading を for 2 times and けた けた, で, T cells undergo <s:1> depletion, <s:1> ったが ったが, and B cells experience an increase in <s:1> MFIが and た た. The increase rate of GFP and MFI られた, the increase of T cells and B cells after で に restraint, the increase of に after 3 hours, the decrease of に after 3 hours, and the increase of に again び after 24 hours. The する tendency が can be seen in られた. こ れ ら の results か ら GFP の - degree of dynamic の は types of white blood cells の に よ っ て も different な る が, determining は constraint の が after 24 time most も し て い る と exam え ら れ た. (2) ま た タ ン パ ク 発 now を ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト determination of で す る と, remove straight after に GILZ の み raised plus が see ら れ た. The appearance of GFP <s:1> mRNA is にばら and にばら が が が. Youdaoplaceholder2 and タ <s:1> パ. The appearance of <s:1> in the パ mass is に. After rectifying, に is slightly increased and the appearance is て and た た. (3) A frozen section of the さらに spleen tissue を was used to produce cells with さらに てGFP を検, and する とを とを was tested for みた. そ の results, 1 time fixed が で は not quite で あ り, 4 time で は cells が ま り に く く, 2 time で GFP and T cells に dyeing was possible と え ら れ た. Cite 続 続 タ パ パ パ the occurrence of やGFP staining <s:1> conditions を検 in the discussion of である.