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自己免疫疾患マウスモデルにおけるB細胞免疫寛容破綻メカニズムの解析

自身免疫性疾病小鼠模型B细胞免疫耐受破坏机制分析

基本信息

批准号：
22K07030
负责人：
田中ゆり子
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、生後早期よりシェーグレン症候群（SS）様病態を呈するSS疾患モデルマウスを用いて、自己反応性T細胞が正常なB細胞を自己抗体産生細胞に分化させるメカニズムを解析した。血球系細胞特異的に核内転写制御因子SATB1 (Special AT-rich sequence binding protein-1)を欠損するSATB1 cKOマウスをSS疾患モデルとして用いた。SATB1 cKOマウス頸部リンパ節T細胞を分離したのち、C57BL/6 (B6) ヌードマウスに移入した。経時的にヌードマウスにおけるSSの発症を唾液分泌量の測定により解析した。さらに、ヌードマウス頸部リンパ節、唾液腺でのB細胞活性化をフローサイトメトリー、免疫組織染色により解析した。実験に用いたヌードマウス血清を採取し、正常マウス唾液腺組織蛋白質で免疫沈降を行い、高速液体クロマトグラフ-質量分析計(LC-MS/MS)を用いて自己抗原候補分子の探索を行なった。SATB1 cKOマウス頸部リンパ節T細胞をヌードマウスに移入後、5週目には血清中に自己抗体産生が認められ、経時的に増加した。さらに、T細胞移入後３ヶ月以上経過してもヌードマウスの頸部リンパ節から胚中心B細胞が検出された。病理学的解析では、唾液腺組織内に胚中心様の濾胞形成が確認された。以上の結果よりSSモデルマウスの自己反応性T細胞は、ヌードマウスの正常B細胞を活性化し自己抗体産生細胞へと分化させることが明らかとなった。さらに、自己反応性T細胞を移入したヌードマウスでは、リンパ節のみならずリンパ節以外の組織内でも自己抗体産生B細胞が活性化常態で長期間維持されている可能性が示唆された。LC-MS/MS解析結果から、SS様病態を呈したヌードマウス血清中抗体が結合する蛋白が抽出され、現在解析を進めている。

In this study, we analyzed the differentiation of early postnatal SS syndrome (SS) from normal B cells to antibody-producing cells. SATB1 (Special AT-rich sequence binding protein-1), a cell line-specific nuclear regulatory factor, is used to control the development of SS disorders. SATB1 cKO is the first to isolate T cells from the neck region, C57BL/6 (B6). The analysis of salivary secretion of SS In addition, B cell activation in salivary glands and neck tissues was analyzed by immunohistochemical staining. In fact, we use ITATARIMA to collect serum, perform immune sedimentation of proteins from normal MASMA salivary gland tissue, and use high-speed liquid chromatograph-mass spectrometry (LC-MS/MS) to explore our own antigen candidate molecules. SATB1 cKO gene expression in the neck of T cells increased 5 weeks after transplantation. 3 months after T cell transplantation, B cells were detected in the embryonic center. Pathological analysis confirmed the formation of embryo centers and filter cells in salivary gland tissues. The above results show that the anti-T cells of SS cells are activated and differentiated from normal B cells. In addition, the possibility of autoantibody production in tissues other than those in which autoantibody T cells migrate into and out of the tissues indicates that autoantibody B cells may be activated and maintained for a long time. LC-MS/MS analysis results show that the SS protein is extracted from the serum, and the SS protein is extracted from the serum.