新規ロタウイルス分離株に基づく病原性および抗原性の解析

基于新型轮状病毒分离株的致病性和抗原性分析

• 批准号: 22K07095
• 负责人: 藤井 克樹
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Institute of Infectious Diseases
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07095/
• 关键词: ロタウイルス; ウイルス分離; MA104細胞; 回転培養; 病原性; 抗原性

初年度はまず、本研究代表者が保有している臨床検体（便）検体からロタウイルス（RV）の分離を試みた。細胞株はRVの培養実験で汎用されているMA104（MA104-WT）細胞と、STAT1およびIRF3の発現を抑制したMA104-N*V細胞（スタンフォード大学より分与）を使用し、培養方法は24 well plateによる静置培養と培養チューブによる回転培養を行い、これらの条件で分離の効率を比較した。臨床検体はDS-1-like G1P[8]、DS-1-like G3P[8]、AU-1-like G3P[9]、G9P[8] (lineage 3)、G9P[8] (lineage 6)を用いた。結果的に、ウイルスの分離効率の順番は、MA104-WT（静置培養）＜MA104-WT（回転培養）≦MA104-N*V（静置培養）＜MA104-N*V（回転培養）であり、MA104-N*V（回転培養）の条件ではいずれのウイルス株も分離に成功した。特にAU-1-like G3P[9]は分離効率が非常に高く、どの条件でも2継代目から明らかな細胞障害効果（CPE）が見られた。プラークアッセイを実施したところ、MA104-N*V 細胞はMA104-WT細胞と比較して10倍～2000倍多くCPEが見られ、その差は株によって大きく異なっていた。従って、ウイルス量の測定に関してプラーク数で定量する方法は相応しくないと考えられた。また、他の細胞株の利用可能性を探るためVero、HT-29、Caco-2、CV-1、293T細胞を用いてWa株の増殖効率を比較したが、MA104細胞より増殖効率の良い細胞は無かった。ここまでの実験から、RVの分離や増殖にはMA104-N*V（回転培養）の条件が最適であることが判明したため、今後、他の遺伝子型のRV株分離にはこの条件で行う予定である。

At the beginning of the year, the representative of this study kept the separation test of clinical examination (stool) and RV. Cell strain RV culture was widely used to inhibit the production of MA104 (MA104-WT) cells, STAT1 and IRF3, and MA104-N*V cells were cultured on a 24-well plate, cultured in a static culture, cultured in a reverse-culture, and the isolation efficiency of these conditions was compared. DS-1-like G1P [8], DS-1-like G3P [8], AU-1-like G3P [9], G9P [8] (lineage3), G9P [8] (lineage6) are used in clinical diagnosis. The results showed that MA104-WT <MA104-WT <MA104-N * V <MA104-N*V> In particular, AU-1-like G3P[9] has a very high separation efficiency and high conditions for cell damage (CPE). MA104-N*V cells are 10-to 2000-fold more CPE than MA104-WT cells. The method of quantitative determination of the quantity of the substance is related to the study of the substance. To explore the possibility of using other cell lines, Vero, HT-29, Caco-2, CV-1, 293T cells were used to compare the proliferation rate of Wa strains. The optimal conditions for RV isolation and propagation were identified for MA104-N*V (re-culture). In the future, the optimal conditions for RV isolation and propagation of other progeny were determined.

项目成果

Complete genome analyses of G12P[8] rotavirus strains from hospitalized children in Surabaya, Indonesia, 2017-2018

2017-2018 年印度尼西亚泗水住院儿童 G12P[8] 轮状病毒株的完整基因组分析

• DOI: 10.1002/jmv.28485
• 发表时间: 2023
• 期刊: Journal of Medical Virology
• 影响因子: 12.7
• 作者: Laura Navika Yamani;Takako Utsumi;Yen Hai Doan;Yoshiki Fujii;Zayyin Dinana;Rury Mega Wahyuni;Emily Gunawan;Soegeng Soegijanto;Alpha Fardah Athiyyah;Subijanto Marto Sudarmo;Reza Gunadi Ranuh;Andy Darma;Soetjipto;Juniastuti;Rheza Gandi Bawono,
• 通讯作者: Rheza Gandi Bawono,

新規NSP4モノリアソータントG1P[8]-E2ロタウイルス株の分子特性および進化学的解析（Analyses of molecular characteristics and evolution of novel NSP4 mono-reassortant G1P[8]-E2 rotavirus strain）

新型NSP4单重配G1P[8]-E2轮状病毒株的分子特征和进化分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 藤井克樹;津川毅;村松正道
• 通讯作者: 村松正道

Isolation and Genome Sequencing of Hepatitis E Virus Genotype 1 Imported from India to Japan

• DOI: 10.7883/yoken.jjid.2022.127
• 发表时间: 2022-11-01
• 期刊: JAPANESE JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES
• 影响因子: 2.2
• 作者: Kobayashi, Sakura;Mori, Ai;Suzuki, Ryosuke
• 通讯作者: Suzuki, Ryosuke

Changes in the distribution of genotype constellations of rotavirus strains after rotavirus vaccine introduction in Asian and African countries

亚洲和非洲国家引入轮状病毒疫苗后轮状病毒株基因型分布的变化

• 发表时间: 2022
• 作者: Yen Hai Doan;Nobuhiro Takemae;Toshihiko Suzuki Francis Ekow Dennis3;George Enyimah Armah;Takako Utsumi;Ikuo Shoji;Laura Navika Yamani;Okayama University;Manta Chawla-Sarkar;Tomoichiro Oka;Yoshiki Fujii;Hiroyuki Shimizu;Masamichi Muramatsu;Tsu
• 通讯作者: Tsu

ロタウイルスの培養細胞における増殖系の効率化とウイルス分離

培养轮状病毒细胞中生长系统和病毒分离的效率

• 发表时间: 2022
• 作者: Yen Hai Doan;Nobuhiro Takemae;Toshihiko Suzuki Francis Ekow Dennis3;George Enyimah Armah;Takako Utsumi;Ikuo Shoji;Laura Navika Yamani;Okayama University;Manta Chawla-Sarkar;Tomoichiro Oka;Yoshiki Fujii;Hiroyuki Shimizu;Masamichi Muramatsu;Tsu;藤井克樹
• 通讯作者: 藤井克樹