新規ロタウイルス分離株に基づく病原性および抗原性の解析

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初年度はまず、本研究代表者が保有している臨床検体（便）検体からロタウイルス（RV）の分離を試みた。細胞株はRVの培養実験で汎用されているMA104（MA104-WT）細胞と、STAT1およびIRF3の発現を抑制したMA104-N*V細胞（スタンフォード大学より分与）を使用し、培養方法は24 well plateによる静置培養と培養チューブによる回転培養を行い、これらの条件で分離の効率を比較した。臨床検体はDS-1-like G1P[8]、DS-1-like G3P[8]、AU-1-like G3P[9]、G9P[8] (lineage 3)、G9P[8] (lineage 6)を用いた。結果的に、ウイルスの分離効率の順番は、MA104-WT（静置培養）＜MA104-WT（回転培養）≦MA104-N*V（静置培養）＜MA104-N*V（回転培養）であり、MA104-N*V（回転培養）の条件ではいずれのウイルス株も分離に成功した。特にAU-1-like G3P[9]は分離効率が非常に高く、どの条件でも2継代目から明らかな細胞障害効果（CPE）が見られた。プラークアッセイを実施したところ、MA104-N*V 細胞はMA104-WT細胞と比較して10倍～2000倍多くCPEが見られ、その差は株によって大きく異なっていた。従って、ウイルス量の測定に関してプラーク数で定量する方法は相応しくないと考えられた。また、他の細胞株の利用可能性を探るためVero、HT-29、Caco-2、CV-1、293T細胞を用いてWa株の増殖効率を比較したが、MA104細胞より増殖効率の良い細胞は無かった。ここまでの実験から、RVの分離や増殖にはMA104-N*V（回転培養）の条件が最適であることが判明したため、今後、他の遺伝子型のRV株分離にはこの条件で行う予定である。