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液-液相分離による分子濃縮から解き明かすパラミクソウイルスの増殖機構

通过液-液相分离从分子浓缩阐明副粘病毒传播机制

基本信息

批准号：
22K07108
负责人：
加藤大志
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

液-液相分離(LLPS)と呼ばれる分子濃縮が、細胞の様々な生理機能に関わっていることが近年明らかになってきた。LLPSは、必要なタンパク質や核酸を選択的かつ局所的に濃縮することで、それぞれの化学反応を効率的に進める働きがある。ウイルスもまた、細胞内で効率よく増殖するために、LLPSを利用すると考えられるが、まだ十分に研究は進んでいない。本申請課題では、医学・獣医学上重要な病原体が数多く含まれるパラミクソウイルスの増殖機構をLLPSによる分子濃縮の観点から明らかにし、パラミクソウイルス感染症の治療薬開発につなげることを目的とする。今年度は代表的なパラミクソウイルスであるムンプスウイルス(MuV)の増殖過程の中で分子濃縮が要求される粒子形成過程において、関与する宿主因子を探索した。ビオチンリガーゼであるTurboIDをN末端ドメインとC末端ドメインに分割し、MuVの2つの膜タンパク質であるFタンパク質およびHNタンパク質の細胞質領域に導入した。両タンパク質を発現させた細胞にビオチンを添加し、その後ビオチン化タンパク質をストレプトアビジンで精製・濃縮し、質量分析によって同定した。その中から、SNARE複合体を構成するUSE1に着目し、MuV増殖における役割を解析した。USE1はFタンパク質とERにおいて相互作用した。さらにsiRNAを用いてUSE1をノックダウンした細胞ではFタンパク質の発現量の低下や、正確な糖鎖付加が起きなかったことから、USE1はMuVのFタンパク質の安定性や糖鎖修飾への関与を通して、MuVの増殖に重要な宿主因子であることが明らかになった。

Liquid-liquid phase separation (LLPS) is a method of concentrating molecules and improving the physiological functions of cells. It has been developed in recent years. LLPS, the necessary nucleic acid quality and nucleic acid selection, concentration, and chemical reaction efficiency of the laboratory.ウイルスもまた, intracellular efficiency よくために, LLPS をutilization するとtest えられるが, まだ十に Research んでいない. The subject of this application is the number of medically important pathogens of animal species including the LLPS The molecular concentration of よる is concentrated in the から明らかにし, パラミクソウイルス infectious disease treatment 薬开発につなげることをpurpose とする. The reproduction process of this year’s representative Nautilus Vulcan (MuV) The requirements for the concentration of molecules in the particle formation process and the exploration of host factors are involved.ビオチンリガーゼであるTurboIDをN terminal ドメインとC terminal ドメインにdividedし、Mu Vの2つの片タンパク性であるFタンパク性およびHNタパク性のcytoplasmic domain にINTRODUCE した.両タンパク性を発appearsさせたcellにビオチンをaddし、その后ビオチン化タンThe quality of the product is refined and concentrated, and the quality analysis is done with the same quality.その中から、SNARE complex をConstitutionするUSE1に目し、MuV propagation におけるServant cutting をAnalysisした. USE1はFタンパク性とERにおいてinteractionした.さらにsiRNAを Use いてUSE1をノックダウンしたCell ではFタンパクquality の発existing のlow や、correct なsugar lock payment plus がrise きなかったことから, USE1はMuVのFタンパクqualityのstabilityやsugar-locked modificationへの关与を通して、MuVのincreased reproductionにimportantなhost factorであることが明らかになった.