代謝改変によるCAR-T細胞療法の有効性向上の試み

尝试通过代谢修饰提高CAR-T细胞治疗的有效性

• 批准号: 22K07228
• 负责人: 三輪 啓志
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07228/
• 关键词: CAR-T細胞; エネルギー代謝; 解糖阻害薬

CD19 CAR-T細胞を抗原（プレートコートしたCD19抗原）刺激時に解糖阻害薬：2-deoxyglucose (2-DG)を添加することにより、γ-IFN産生に及ぼす影響を検討した。αβT細胞では2-DG 0.5mMでコントロールに比べγ-IFN産生が約20％増加した。γδT細胞では2-DG 0.5mMあるいは2mMでγ-IFN産生が20～30％増加した。低濃度の解糖阻害によるγ-IFN産生亢進の機序として、糖新生→グリコーゲン生成、分解→ペントースリン酸回路活性化→NADPHの産生亢進（redox改善）によるＴ細胞疲弊の解除→エフェクター機能亢進　を想定しているが、Glycogen Phosphorylase Inhibitor あるいはペントースリン酸回路の阻害薬である6-aminonicotinamide (6-AN)の添加は低濃度の解糖阻害によるγ-IFN産生亢進を低下させた。特に6-AN添加によりγ-IFN産生亢進は強力にキャンセルされた。低濃度の解糖阻害によるCAR-T細胞の代謝の変化を観察するため細胞外フラックスアナライザー（Seahorse）による解析をおこなった。2mM 2-DG添加により、basal oxygen consumption rate (OCR) の上昇が認められ、ミトコンドリアでの酸化的リン酸化（酸素消費）が亢進していることが推察された。今後は、低濃度の解糖阻害によりCAR-T細胞中の活性酸素（ROS）が減少するかどうか、また、疲弊マーカーの推移等を観察していく。さらに低濃度の解糖阻害によるγ-IFN産生亢進が標的細胞傷害に寄与しているかを観察する。

CD19 CAR-T cell antigen (CD19 antigen) stimulates glycolysis inhibitor: 2-deoxyglucose (2-DG) has a positive impact on the production and production of γ-IFN. αβT cell 2-DG 0.5mM でコントロールに increased production by approximately 20% compared to γ-IFN. γδT cell 2-DG 0.5mM γ-IFN 2mM increased the production of γ-IFN by 20~30%. Low-concentration glycolytic inhibitor inhibits the mechanism of hyperactive γ-IFN production and gluconeogenesis → Glycolytic production and decomposition → Activation of ペントースリン acid circuit → N Increased ADPH production (redox improvement) and elimination of T cell fatigue → Hyperfunction of ADPH, Glycogen Phosphorylase Inhibitor Phosphorylase Inhibitor 6-aminenicotinamide The addition of (6-AN) at a low concentration inhibits glycolysis and increases or decreases the production of γ-IFN. Special 6-AN adds によりγ-IFN to produce hyperactive and powerful にキャンセルされた. Glucolysis at low concentrations inhibits the metabolism of CAR-T cells and changes the metabolism of CAR-T cells.外フラックスアナライザー（Seahorse）によるanalytic をおこなった. 2mM 2-DG added により, basal oxygen consumption rate (OCR)のrise が められ、ミトコンドリアでの acidification リン acidification (acid consumption) が Hyperactivity していることが inference された. In the future, the reduction of reactive oxygen species (ROS) in CAR-T cells caused by low-concentration glycolytic blockade and the reduction of fatigue and the progression of fatigue will be investigated. The low-concentration glycolytic enzyme inhibits the production of gamma-IFN and causes targeted cell damage.