代謝改変によるCAR-T細胞療法の有効性向上の試み

CD19 CAR-T細胞を抗原（プレートコートしたCD19抗原）刺激時に解糖阻害薬：2-deoxyglucose (2-DG)を添加することにより、γ-IFN産生に及ぼす影響を検討した。αβT細胞では2-DG 0.5mMでコントロールに比べγ-IFN産生が約20％増加した。γδT細胞では2-DG 0.5mMあるいは2mMでγ-IFN産生が20～30％増加した。低濃度の解糖阻害によるγ-IFN産生亢進の機序として、糖新生→グリコーゲン生成、分解→ペントースリン酸回路活性化→NADPHの産生亢進（redox改善）によるＴ細胞疲弊の解除→エフェクター機能亢進　を想定しているが、Glycogen Phosphorylase Inhibitor あるいはペントースリン酸回路の阻害薬である6-aminonicotinamide (6-AN)の添加は低濃度の解糖阻害によるγ-IFN産生亢進を低下させた。特に6-AN添加によりγ-IFN産生亢進は強力にキャンセルされた。低濃度の解糖阻害によるCAR-T細胞の代謝の変化を観察するため細胞外フラックスアナライザー（Seahorse）による解析をおこなった。2mM 2-DG添加により、basal oxygen consumption rate (OCR) の上昇が認められ、ミトコンドリアでの酸化的リン酸化（酸素消費）が亢進していることが推察された。今後は、低濃度の解糖阻害によりCAR-T細胞中の活性酸素（ROS）が減少するかどうか、また、疲弊マーカーの推移等を観察していく。さらに低濃度の解糖阻害によるγ-IFN産生亢進が標的細胞傷害に寄与しているかを観察する。

CD19 CAR-T細胞を抗原（プレートコートしたCD19抗原）刺激時に解糖阻害薬：2-deoxyglucose (2-DG)を添加することにより、γ-IFN産生に及ぼす影響を検討した。αβT細胞では2-DG 0.5mMでコントロールに比べγ-IFN産生が約20％増加した。γδT細胞では2-DG 0.5mMあるいは2mMでγ-IFN産生が20～30％増加した。低濃度の解糖阻害によるγ-IFN産生亢進の機序として、糖新生→グリコーゲン生成、分解→ペントースリン酸回路活性化→NADPHの産生亢進（redox改善）によるＴ細胞疲弊の解除→エフェクター機能亢進　を想定しているが、Glycogen Phosphorylase Inhibitor あるいはペントースリン酸回路の阻害薬である6-aminonicotinamide (6-AN)の添加は低濃度の解糖阻害によるγ-IFN産生亢進を低下させた。特に6-AN添加によりγ-IFN産生亢進は強力にキャンセルされた。低濃度の解糖阻害によるCAR-T細胞の代謝の変化を観察するため細胞外フラックスアナライザー（Seahorse）による解析をおこなった。2mM 2-DG添加により、basal oxygen consumption rate (OCR) の上昇が認められ、ミトコンドリアでの酸化的リン酸化（酸素消費）が亢進していることが推察された。今後は、低濃度の解糖阻害によりCAR-T細胞中の活性酸素（ROS）が減少するかどうか、また、疲弊マーカーの推移等を観察していく。さらに低濃度の解糖阻害によるγ-IFN産生亢進が標的細胞傷害に寄与しているかを観察する。