αシヌクレイン過剰発現マウスを用いたαシヌクレインの機能と病態解析

使用 α-突触核蛋白过表达小鼠对 α-突触核蛋白进行功能和病理分析

• 批准号: 22K07376
• 负责人: 鈴木 ちぐれ
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Juntendo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07376/
• 关键词: α シヌクレイン過剰発現; カテプシンD欠損マウス; 脳組織形態; 超微形態解析; α シヌクレイン; シヌクレノパチー; カテプシンD; 遺伝子改変マウス

αシヌクレインは神経細胞のシナプス終末に局在する機能が未解明のタンパク質でリン酸化αシヌクレインの蓄積と神経疾患の関係が注目されている。研究代表者らの先行研究では、リソソーム酵素であるカテプシンDを神経細胞特異的に欠損させたマウス(CtsD-Nes)の脳内でリン酸化αシヌクレインが蓄積していた。そこで、αシヌクレインの正常機能と病態時の神経病理像の検証のため、正常αシヌクレイン過剰発現型（hSNCA-mKate2）・CtsD-Nesマウスを作成した。本研究の目的は、①hSNCA-mKate2マウスにより、正常脳・神経におけるαシヌクレインの細胞内局在と超微形態を明らかにし、②hSNCA-mKate2-CtsD-Nesマウスで、オートファジー・リソソーム分解機構とαシヌクレインの関連を組織形態学的に解明する事である。実験計画①　hSNCA-mKate2マウスの形態学的解析（令和４年度）：については、高感度免疫電顕(In-resin CLEM)にてmKate2集積部にシナプス小胞集積が確認された世界初のIn-resin CLEM可能なマウスとして第128回解剖学会総会・全国学術集会にてポスター発表を行った。また、正常ヒトαシヌクレインの過剰発現は神経変性を誘導せず、シナプス終末部にて小胞のプールに関与することを形態学的に証明することができた。結果について、現在論文執筆中である。実験計画②　hSNCA-mKate2-CtsD-Nesマウスを用いた解析（令和４‐６年度）：については、hSNCA-mKate2-CtsD-Nes はCtsD-Nesと同様生後20日ごろより徐々に進行する神経症状と体重減少を示している。hSNCA-mKate2-CtsD-Nesでは、生後25日前後の視床の電子顕微鏡による観察にて線維の集塊様の構造物を多数認めている。

The relationship between the accumulation of α-amyloid and neurologic disorders has been studied. The research representative's previous research showed that the enzyme concentration of CtsD-Nes accumulated in the brain cells. The normal function of α-CsD-Nes and pathological neuropathology of α-CsD-Nes are established. The purpose of this study is to (1) clarify the ultrastructural changes in the intracellular structure of hSNCA-mKate2, normal neurons, and (2) clarify the histomorphological changes in the cellular structure of hSNCA-mKate2-CtsD-Nes, and the relationship between the cellular structure of hSNCA-mKate2-CtsD-Nes and α-Cys. Project ① Morphological analysis of hSNCA-mKate2 (Year 4): In-resin CLEM for high sensitivity immune response (In-resin CLEM) for identification of microcellular aggregation of mKate2, and possible development of In-resin CLEM for the first time in the world at the 128th National Society of Anatomy Conference. In addition, the expression of normal cells in the brain is related to the morphology of the cells. The result is, and now the paper is being written. Project ② hSNCA-mKate2-CtsD-Nes analysis of its use (Year 4 - 6): hSNCA-mKate2-CtsD-Nes and CtsD-Nes analysis of its use (Year 4 - 6): hSNCA-mKate2-CtsD-Nes analysis of hSNCA-mKate2-CtsD-Nes was observed by electron microscopy at the viewing bed around 25 days after birth.

项目成果

神経セロイドリポフスチン症モデルマウス脳におけるグリア細胞のImmuno-in-resin CLEMによる超微形態像の解析

免疫树脂 CLEM 分析神经元蜡质脂褐质沉着症模型小鼠脑中胶质细胞的超微结构图像

• 发表时间: 2022
• 作者: 三井駿;山口隼司;鈴木ちぐれ;谷田以誠;内山安男
• 通讯作者: 内山安男