Investigation of apolipoproteins transfer quantitative method and their mechanism

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１．リポタンパク間のアポリポタンパク転送の定量法の確立高比重リポタンパク（HDL）とビオチン標識した超低比重リポタンパク（VLDL）とを生体内の平均的なタンパク濃度比で混合し，インキュベーションを行い，その後，超遠心によって再びHDLを分離した．分離したHDL中に転送されたアポリポタンパクをウエスタンブロッティング（ストレプトアビジンで視覚化）および液体クロマトグラフィー質量分析（LC-MS/MS）で分析したところ，われわれが既に明らかにしたアポリポタンパクC-II，C-III，Eに加えて，まだ不確定であったアポリポタンパクC-IVがVLDL濃度依存的にHDLに転送されていることを確認した．転送量を定量するために，ELISA法を用いた転送量の評価法を構築すべく，まず初めにアポリポタンパクC-IIを対象に試みた．その結果，HDLタンパク濃度あたりで1.0×10^-5　mg/mL程度まで高感度に定量することが可能となった．２．VLDL中の中性脂肪の被水解率の評価アポリポタンパク転送後の各種脂質代謝に与える影響を確認するため，はじめにVLDL中の中性脂肪の被水解率評価法の確立を目指した．血漿を対象とした場合とVLDLを対象とした場合では，リポタンパクリパーゼに対するVLDL中の中性脂肪の水解の速度は異なり，その要因として，血漿中に存在する他のリポタンパクがリポタンパクリパーゼのVLDLへのアクセスを抑制していることが示唆された．この現象を確認するために，各種リポタンパク分画，アルブミンやグロブリンを主に含むリポタンパク以外の血漿タンパク成分を含む分画を用いて検証した．その結果，HDLが最もVLDL中の中性脂肪に対するリポタンパクリパーゼの作用に対する抑制効果が強いことが明らかになった．