Investigation of apolipoproteins transfer quantitative method and their mechanism

载脂蛋白转移定量方法及其机制研究

• 批准号: 22K07466
• 负责人: 大川 龍之介
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07466/
• 关键词: アポリポタンパク転送; 中性脂肪代謝; リポタンパクリパーゼ; 高比重リポタンパク; 超低比重リポタンパク; リポタンパク; アポリポタンパク; 転送; 脂質代謝

１．リポタンパク間のアポリポタンパク転送の定量法の確立高比重リポタンパク（HDL）とビオチン標識した超低比重リポタンパク（VLDL）とを生体内の平均的なタンパク濃度比で混合し，インキュベーションを行い，その後，超遠心によって再びHDLを分離した．分離したHDL中に転送されたアポリポタンパクをウエスタンブロッティング（ストレプトアビジンで視覚化）および液体クロマトグラフィー質量分析（LC-MS/MS）で分析したところ，われわれが既に明らかにしたアポリポタンパクC-II，C-III，Eに加えて，まだ不確定であったアポリポタンパクC-IVがVLDL濃度依存的にHDLに転送されていることを確認した．転送量を定量するために，ELISA法を用いた転送量の評価法を構築すべく，まず初めにアポリポタンパクC-IIを対象に試みた．その結果，HDLタンパク濃度あたりで1.0×10^-5　mg/mL程度まで高感度に定量することが可能となった．２．VLDL中の中性脂肪の被水解率の評価アポリポタンパク転送後の各種脂質代謝に与える影響を確認するため，はじめにVLDL中の中性脂肪の被水解率評価法の確立を目指した．血漿を対象とした場合とVLDLを対象とした場合では，リポタンパクリパーゼに対するVLDL中の中性脂肪の水解の速度は異なり，その要因として，血漿中に存在する他のリポタンパクがリポタンパクリパーゼのVLDLへのアクセスを抑制していることが示唆された．この現象を確認するために，各種リポタンパク分画，アルブミンやグロブリンを主に含むリポタンパク以外の血漿タンパク成分を含む分画を用いて検証した．その結果，HDLが最もVLDL中の中性脂肪に対するリポタンパクリパーゼの作用に対する抑制効果が強いことが明らかになった．

1. The quantitative method for the determination of high specific gravity (HDL) and ultra-low specific gravity (VLDL) and the average concentration ratio of the mixture in vivo. In the separation of HDL, there is no difference between the number of samples and the number of samples. The analysis of liquid crystal mass spectrometry (LC-MS/MS) is based on the determination of HDL concentration dependent on C-II, C-III, E and VLDL. The method of quantitative determination of the amount of DNA was established by ELISA. 2. Evaluation of the hydrolysis rate of neutral fat in VLDL and confirmation of the effects of various lipid metabolism after transmission. In the case of plasma and VLDL, the hydrolysis rate of neutral fat in VLDL is different, and the main reason is that the existence of other neutral fat in plasma inhibits the hydrolysis of VLDL. This phenomenon is confirmed by the analysis of various components of plasma. As a result, HDL is the most potent inhibitor of neutral fat in VLDL.

项目成果

The effect of sampling procedure and substrate type for activity assay on PON1 assessment

采样程序和活性测定底物类型对 PON1 评估的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: Kawaguchi R.;Kameda T.;Yoshimoto A.;and Ohkawa R.
• 通讯作者: and Ohkawa R.

1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)を用いた各種血液検体の抗酸化能測定の臨床応用に向けた試み

使用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）测定各种血液样本抗氧化能力的临床应用尝试

• 发表时间: 2022
• 作者: Yamada T.;Kameda T.;and Ohkawa R.;大熊 彩花，荻野 芽生，亀田 貴寛，大川 龍之介
• 通讯作者: 大熊 彩花，荻野 芽生，亀田 貴寛，大川 龍之介

Development of internal standard for lipoprotein subclass analysis using dual detection gel-permeation HPLC system

使用双重检测凝胶渗透 HPLC 系统开发脂蛋白亚类分析的内标

• 发表时间: 2022
• 作者: Ogino M.;Kameda;Mutsuda Y.;Tanaka H.;Takahashi J.;Okazaki M.;Ai M.;and Ohkawa R
• 通讯作者: and Ohkawa R

The effect of high-density lipoprotein N-homocysteinylation on paraoxnase1 activities and distribution

高密度脂蛋白N-同型半胱氨酸化对对氧酶1活性和分布的影响

• 发表时间: 2022
• 作者: Kawaguchi R.;Kameda T.;Yoshimoto A.;and Ohkawa R
• 通讯作者: and Ohkawa R

Improvement of serum antioxidant capacity assay using 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl

使用 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼改进血清抗氧化能力测定

• 发表时间: 2022
• 作者: Ogino M.;Kameda T.;and Ohkawa R
• 通讯作者: and Ohkawa R