赤血球結合IgGのサブクラス別測定法の確立とAIHAにおける溶血機序の考察

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フローサイトメトリーによる赤血球結合IgGのサブクラス別定量法を確立することを目指した。①当初予定していた福山臨床検査センターの研究協力者の体調不良による退職のため、BeckmanCoulter CytoFLEXから山口大学医学部保健学科に設置してあるMACSQuant Analyzer10で解析を行うこととなった。まずサブクラス別測定をするための基礎技術である赤血球結合IgG定量法の技術の獲得と信頼性のあるデータを出すためのトレーニングから始めた。健常検体と主治医からインフォームド・コンセントが得られ赤血球結合IgG定量検査目的で福山臨床検査センターに送付された検体を用いて検討を行った。福山臨床検査センターの検体は冷蔵で山口大学に輸送してもらった。使用した抗体は福山臨床検査センターで使用している抗体と同じものを使用した。結果は、機種間の違いにより測定値が約10倍違うが、関連性のある値が得られた。検体の古さにより、若干結果が乖離する検体があったため、原因を追求する必要がある。②赤血球結合IgGのサブクラス別定量を行うため、IgG1およびIgG3抗体を３つのメーカーから購入した。市販されている抗体は、メーカーにより結合性の違いから分布と平均値にかなりの差が認められ、結果が異なってくるため、種々の抗体を調べ、高感度で特異性の高い抗体を検索する必要がある。また、使用する抗体量や反応温度、時間などの最適化が必要である。現在、この抗体を用いて健常検体を測定し、使用可能かどうか検討中であるが、低値であるため高値検体の測定が必要である。③福山臨床検査センターに送られてきた検体はCoombs試験陰性のAIHA疑いの検体であるため、先天的な異常を除外するため、グロビン遺伝子定量やシーケンシングにより確認をしている。