The clarification of pathomechanism and the establishment of treatment for repeat expansion-associated amyotrophic lateral sclerosis

重复扩张相关性肌萎缩侧索硬化症发病机制的阐明及治疗方法的建立

• 批准号: 22K07510
• 负责人: 平野 牧人
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kindai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07510/
• 关键词: 核酸治療薬; 筋萎縮性側索硬化症; リピート病; 病態解明; 治療法開発

本研究では、筋萎縮性側索硬化症(ALS)に関連する、SCA8の原因遺伝子ATXN8OS/ATXN8、SCA2の原因遺伝子ATXN2、未発表の遺伝子Xの反復配列を有するALS患者由来の運動ニューロン(iMN)モデルを確立して、病理組織での確認を行いつつ、治療法開発を行う。１．病理的にALSと確認されている患者の遺伝子発現プロファイル：本年度は、SCA8原因遺伝子異常例のiMNで網羅的に、alternative splicingの変化が生じるかを正常iMNと比較してマイクロアレイ(ClariomD)にて検索した。その結果、ALSの原因になりうるDynactin-1のスプライス異常が疑われた。特異的プライマーを用いたRT-PCRでは、残念ながら明らかな異常は検出できなかった。一方、ALSに関連する遺伝子Yの発現は亢進していた。2. iMNの染色とRAN翻訳確認：SCA8遺伝子異常陽性剖検小脳では、異常なRNA凝集(RNA foci)が生じる。SCA8の患者iMNに、蛍光標識したリピートのプローブを用いて、RNA fociを検出を試みた。この結果、RNA fociが細胞質に検出された。RAN翻訳として病的意義が知られている抗ポリグルタミン特異的抗体1C2で、免疫染色を行う。また、その他のポリアミノ酸あるいは、それに続くアミノ酸配列に対するポリクローナル抗体を作成したが、免疫染色を行った。その結果、SCA8患者由来iMNで２種のRAN翻訳蛋白が細胞質内に凝集していることが判明した。3．iMNへの治療介入：形態変化に加えて細胞生存率、免疫染色を指標として、実験的治療を行う。SCA8原因遺伝子発現量低下を目標に、３種類のsiRNAによる、遺伝子発現抑制ができるかを検討した。形態変化として、軸索が縮小していることが判明した。生存率は有意に増加した。

This study shows that amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is related to amyotrophic lateral sclerosis (ALS), the cause of SCA8 is ATXN8OS/ATXN8, and the cause of SCA2 is ATXN2.発表の缝子1. Pathological diagnosis of ALS and confirmation of patient’s residual disease: This year’s list of abnormal cases of residual disease caused by SCA8 and iMN, alternative splicingの変化が生じるかをNormal iMNとComparisonしてマイクロアレイ(ClariomD)にて検SOした. The result of ALS, the cause of ALS, the abnormality of Dynactin-1, the suspicion of ALS. Special プライマーを Used いたRT-PCR では, zannian ながら明らかなAbnormal は検出できなかった. On the one hand, the relationship between ALS and ALS is still high. 2. Confirmation of iMN staining and RAN translation: abnormal positive SCA8 gene expression, abnormal small RNA agglutination (RNA foci), and abnormality of SCA8 gene. SCA8 patient iMNに、荍光identificationしたリピートのプローブを用いて、RNA fociを検出みた.このRESULTS, RNA fociがcytoplasmに検出された. The significance of RAN translation disease is that the antibody 1C2 specific for anti-rhinoplasty is known and immunostaining is performed.また、そののポリアミノ acid あるいは、それに続くアミノ acid combinationに対するポリクローナルantibodyをmadeしたが, immunostainingを行った. As a result, it was found that two kinds of RAN translation proteins were agglutinated in the cytoplasm of iMN in SCA8 patients. 3. Therapeutic intervention of iMN: morphological change, cell survival rate, immunostaining index, and treatment progress. SCA8 is the cause of the low level of the target, the 3 types of siRNA, and the target of the current suppression of the disease. The shape has changed, and the axon has shrunk, and the axon has become clear. Survival rates are expected to increase.

项目成果

Gene analyses for spinocerebellar ataxia type 2 identify neuropathy phenotype in Japan.

在日本，2 型脊髓小脑共济失调的基因分析确定了神经病表型。

• 发表时间: 2022
• 作者: Rino Inada;Makito Hirano;Nobuyuki Oka;Makoto Samukawa;Kazumasa Saigoh;Hidekazu Suzuki;Fukashi Udaka;Akihiro Hashiguchi;Hiroshi Takashima;Yukihiro Hamada;Yusaku Nakamura;Susumu Kusunoki
• 通讯作者: Susumu Kusunoki