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双極性障害における細胞内カルシウム恒常性異常と時計遺伝子の関連解析

双相情感障碍细胞内钙稳态异常与时钟基因的关系分析

基本信息

批准号：
22K07613
负责人：
上村拓治
金额：
$ 2.75万
依托单位：
University of Yamanashi
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

双極性障害患者では、細胞内ストレスシグナル伝達を担うカルシウムの恒常性異常を認め、『カルシウムチャネルの機能障害』が示唆されているが、双極性障害における躁、うつといった病相の周期的変化や日内変動といった特徴的な病態（『長期周期性を伴う概日リズム異常』）との関連性はまだ十分に解明されていない。本研究は、①細胞内カルシウムの恒常性異常、②気分安定薬であるリチウムの作用機序（GSK3β阻害作用）、③周期性の長期化を伴う時計遺伝子の発現変動、これらを融合させた分子遺伝学・薬理学的機能解析を行うことによって、双極性障害の発症機序を解明することを目的としている。本年度は、リチウムと機能的関連のある時計遺伝子の同定およびリチウム投与時の発現変動を確認し、以下の研究結果を得ることができた。１）リチウムと機能的関連のある時計遺伝子の同定：YKG-1細胞を用いて、概日リズムを担う時計遺伝子であるCLOCK、BMAL1の発現をqRT-PCRで確認した。その後、1mM LiCl長期投与（7日間）時のこれらの遺伝子の発現変動を評価した。1mM LiClの長期投与により、CLOCKおよびBMAL1ともにRNAレベルでの発現が上昇していた。発現の上昇率は、CLOCKよりもBMAL1の方が大きかった。２）リチウムはGSK3β阻害作用を有している。GSK3βとCLOCKおよびBMAL1の関連を確認するために、RNAiベクターによってGSK3βの発現が安定にノックダウンしているYKG-1細胞株を用いて、CLOCKおよびBMAL1の発現を確認した。BMAL1の発現は上昇していたが、当初の予期と反して、CLOCKの発現量は減少していた。

双極性障害患者では、細胞内ストレスシグナル伝達を担うカルシウムの恒常性異常を認め、『カルシウムチャネルの機能障害』が示唆されているが、双極性障害における躁、うつといった病相の周期的変化や日内変動といった特徴的な病態（『長期周期性を伴う概日リズム異常』）との関連性はまだ十分に解明されていない。本研究从①细胞内奇毒素异常性紊乱，②螺杆菌分型确定性溶血性磷脂酶抑制剂作用顺序（GSK3β损伤作用），③周期性溶血期化酶联免疫吸附试验（ELISA）检测抗凝血酶活性，抗凝血酶融合蛋白分子生物学·免疫学的功能分析进行溶血性磷脂酶抑制剂筛选，双抗性溶血性磷脂酶抑制剂顺序明确溶血性磷脂酶抑制剂目的的筛选。本年度は、リチウムと機能的関連のある時計遺伝子の同定およびリチウム投与時の発現変動を確認し、以下の研究結果を得ることができた。1）免疫抑制功能的特异性免疫应答子序列相同确定：YKG-1细胞应用模板、次日免疫抑制子序列特异性CLOCK、BMAL1特异性定量qRT-PCR扩增子序列。加入1mM LiCl缓冲液与（7日龄）氯化钠缓冲液，使其在室温下保持稳定。1mM LiCl氯化锂缓冲期与对照要求，CLOCK缓冲液缓冲BMAL1 mM RNA缓冲液缓冲液缓冲上清。在此之前，CLOCK将要求BMAL1方的大规模采购。2）甘草酸苷GSK3β抗损伤作用有规律可循。GSK3β-CLOCK转染BMAL1细胞株，RNAi转染BMAL 1细胞株，GSK3β-CLOCK转染BMAL 1细胞株，RNAi转染BMAL 1细胞株，GSK3β-CLOCK转染BMAL 1细胞株，GSK 3 β-CLOCK转染BMAL1细胞株，GSK 3 β-CLOCK转染BMAL1细胞株。BMAL1初始化后的上一级正常运行，初始化后给予期间的反正常运行，CLOCK计数量减少后的正常运行。