Elucidation of novel functions of prosaposin in autophagy

阐明 prosaposin 在自噬中的新功能

• 批准号: 22K07856
• 负责人: 石塚 佑太
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07856/
• 关键词: プロサポシン; 網膜色素変性症; グリオーシス; リソソーム; オートファジー; 神経セロイドリポフスチン症

本研究の目的は、プロサポシン過剰発現マウスに見られる視細胞選択的な細胞死のメカニズムをリソソーム機能とオートファジーの異常に着目して明らかにすることである。本年度はまず、野生型およびプロサポシン過剰発現マウス（ヘテロ、ホモ接合体）の眼球を生後経時的に採取し、網膜視細胞脱落の経時的変化を外顆粒層の細胞数（桿体・錐体細胞数を反映）を指標とし定量解析した。その結果、ホモ接合体マウスでは生後2週齢より視細胞の脱落が観察され始め、6週齢においてほぼ完全に脱落することが明らかとなった。また、視細胞脱落に伴うグリア線維性酸性タンパク質（GFAP）陽性細胞（ミュラー細胞）の増加が網膜全層に見られたことからグリオーシスの発生が示唆された。これらプロサポシン過剰発現マウスの網膜病変は網膜色素変性症に酷似している。しかしながら、グリオーシスが視細胞死の原因か結果としての表現型なのかは現時点では不明であり、今後検討する。一方、各遺伝子型マウスの眼球組織およびマウス胎仔線維芽細胞（MEF）を用いた生化学的解析ではリソソームタンパク質の増加およびリソソーム酵素活性の上昇やオートファジーの亢進などを示唆する結果が得られた。興味深いことに、網膜病変を含めたこれらの変化はヘテロ接合体マウスよりホモ接合体マウスの方が大きく、プロサポシン発現量に正の相関を示した。これらの結果は、プロサポシンは網膜機能維持に重要である一方、その異常発現が網膜視細胞死の原因である可能性を強く示唆している。また、リソソームやオートファジー機能を可視化・定量する細胞内プローブや貪食能の解析法を選定し、実験条件の検討を開始した。

The purpose of this study is to find out that the cell death rate selected by the TV cell of the TV station is very sensitive to the fact that the machine is capable of causing serious problems. This year, the number of exocrine cells (reflected by the number of cells in the body) was determined by the quantitative analysis of the number of exocrine cells (as reflected by the number of cells in the body). This year, the number of exocytetic cells (reflected by the number of cells in the body) was detected during the postnatal extraction of the eyeball and the exocytosis of the network membrane. The results showed that 2 years after birth, the cells of the joint were observed to fall off, and the cells fell off completely at 6 years after birth. The cell exfoliation of the camera and the monitor is accompanied by an increase in the number of cells (GFAP) in which the whole network is available. The symptoms of rheumatoid arthritis are similar to those of rheumatoid arthritis. The cause of cell death is not known. The results show that the timing of the clock is unknown, and the clock will be suspended in the future. On the one hand, the eyeball tissue of each subtype was used to detect fetal growth line germ cells (MEF). The biochemical analysis was used to increase the enzyme activity. In the case of network disease, there is a significant difference between the two groups in terms of the content of the product, the amount of the product, and the amount of the product. The results show that the network machine is able to maintain an important party, and it is often found that the cause of cell death in network surveillance is highly likely to indicate the possibility of instigation. The analytical method for quantitative determination of intracellular energy consumption, energy, energy and energy were determined.