免疫賦活およびウイルス宿主免疫抑制機構の抑制によるB型肝炎治療の開発

B型肝炎ウイルス (HBV)の感染を許容するNTCP発現肝がん細胞株 (HepG2-NTCP)に複数の宿主因子を各siRNAにてノックダウンし、HBV複製が抑制された宿主因子の中から、宿主因子Xを同定した。HBVを感染させたHepG2-NTCPに対して宿主因子XをノックダウンするとHBV DNA量およびHBc蛋白発現は低下した。免疫沈降Westen blotにて宿主因子Xは、HBcまたはp22crに結合するもHBX, ポリメラーゼには結合しなかった。また、細胞内においても宿主因子XとHBcが結合することをProximity ligation assayにて確認した。さらに、HBcを移入した後に宿主因子Xを移入すると宿主因子Xの容量依存性にHBCのユビキチン化が抑制された。以上より、宿主因子XはHBVのコア蛋白 (HBc)と結合し、HBcのproteasomal degradationを抑制することが判明した。さらに、宿主因子XとHBcの各々の結合部位を同定し、宿主因子Xのうち、HBcに結合はするもののユビキチン化を起こさない蛋白（dominant negative)を作成し、宿主因子X、HBcとともに細胞に移入させるとHBcはユビキチン化を受けるとともに細胞内HBcは減少した。すなわち、HBcは宿主因子Xと結合することによりユビキチン化およびproteasomal degradationを回避していると考えられた。そこで、我々は宿主因子XとHBcの結合を乖離させる薬剤の開発を考慮し、同スクリ-ニング系の開発を現在行っている。

B型肝炎ウイルス (HBV)の感染を許容するNTCP発現肝がん細胞株 (HepG2-NTCP)に複数の宿主因子を各siRNAにてノックダウンし、HBV複製が抑制された宿主因子の中から、宿主因子Xを同定した。HBVを感染させたHepG2-NTCPに対して宿主因子XをノックダウンするとHBV DNA量およびHBc蛋白発現は低下した。免疫沈降Westen blotにて宿主因子Xは、HBcまたはp22crに結合するもHBX, ポリメラーゼには結合しなかった。また、細胞内においても宿主因子XとHBcが結合することをProximity ligation assayにて確認した。さらに、HBcを移入した後に宿主因子Xを移入すると宿主因子Xの容量依存性にHBCのユビキチン化が抑制された。以上より、宿主因子XはHBVのコア蛋白 (HBc)と結合し、HBcのproteasomal degradationを抑制することが判明した。さらに、宿主因子XとHBcの各々の結合部位を同定し、宿主因子Xのうち、HBcに結合はするもののユビキチン化を起こさない蛋白（dominant negative)を作成し、宿主因子X、HBcとともに細胞に移入させるとHBcはユビキチン化を受けるとともに細胞内HBcは減少した。すなわち、HBcは宿主因子Xと結合することによりユビキチン化およびproteasomal degradationを回避していると考えられた。そこで、我々は宿主因子XとHBcの結合を乖離させる薬剤の開発を考慮し、同スクリ-ニング系の開発を現在行っている。