Mechanism of Immune Cell Activation in theTumor Microenvironment of Colon Cancer with MTAP Deletion

MTAP缺失结肠癌肿瘤微环境中免疫细胞激活机制

• 批准号: 22K08041
• 负责人: 濱田 和幸
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08041/
• 关键词: MTAP; PRMT5; メチル化; がん微小環境; 癌微小環境; 腫瘍免疫; メチオニン代謝

メチオニン代謝において重要な働きをもつメチルチオアデノシンホスホリラーゼ (MTAP)遺伝子の欠失は多くのがん種で観察されている。しかし、MTAP遺伝子の欠失の意義については不明な点も多く、とくに抗腫瘍免疫に対するMTAPの影響は明らかにされていない。本研究は、MTAP遺伝子欠失細胞株腫瘍株を用い、がん微小環境におけるMTAP欠失の抗腫瘍免疫への影響を解析する。さらに、マウスにおいて、腫瘍におけるMTAP欠失が免疫チェックポイント阻害剤 (ICIs)の効果予測因子候補となるか明らかにすることを目的にしている。CRISPR-Cas9を用いマウス大腸がん細胞株のMTAP遺伝子をノックアウトしたクローン細胞を樹立した。MTAP欠失によるメチル化への影響を検討をおこなった。MTAPをノックアウトしたマウス大腸がん細胞株はアルギニンのメチル化酵素Protein Arginine Methyltransferases 5 (PRMT5)の活性低下を起こしていることをウェスタンブロッティング (WB)で確認した。MTAP欠失がもたらす影響はPRMT5不活化が機序の中心にあると考えられる。今後はPRMT5活性低下を介した細胞株レベルでのがん増殖に関与する蛋白発現への影響をＷＢ、ＦＣなどを用いて解析することでMTAP欠失が腫瘍細胞や腫瘍周囲の細胞へ与える影響とその機序を解明していく必要がある。更に、MTAPノックアウトマウス大腸がん細胞株をマウスに接種し腫瘍片を用いて、がん微小環境における免疫細胞の動態を解析していく。

In the case of MTAP, there is a large number of missing genes in the metabolism. The significance of MTAP gene loss is unclear, and the impact of MTAP on anti-tumor immunity is clear. The aim of this study was to analyze the effects of MTAP deficiency on anti-tumor immunity in microenvironment. MTAP is a candidate for ICIs, and it is a candidate for ICIs, and it is a candidate for ICIs. CRISPR-Cas9 is used to establish MTAP genes in large intestine cells. The impact of MTAP's failure on the environment is discussed. MTAP was identified as a low activity enzyme Protein Arginine Methyltransferases 5 (PRMT5). MTAP deficiency affects PRMT5 inactivation at the center of the sequence. In the future, it is necessary to clarify the mechanism of PRMT5 activity reduction in tumor cells and tumor cells by analyzing the effects of WB and FC on protein expression. In addition, MTAP can be used to analyze the dynamics of immune cells in microenvironment.